龍膽苦苷對(duì)匹羅卡品誘發(fā)癲癇小鼠的抗癲癇作用及其對(duì)NR2B-CaMKⅡ-CREB信號(hào)通路的影響.pdf

1、目的：
　　癲癇是神經(jīng)元自發(fā)反復(fù)放電的一種常見(jiàn)大腦疾病。目前癲癇的治療仍以藥物治療為主，但仍有約1/3的患者對(duì)藥物治療不敏感，故迫切需要尋找治療癲癇的新療法。前期研究發(fā)現(xiàn)龍膽苦苷對(duì)N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）受體具有調(diào)節(jié)作用。在本研究中，我們觀察龍膽苦苷（Gentiopicroside,Gent)對(duì)匹羅卡品（Pilocarpine,Pilo）誘發(fā)癲癇發(fā)作小鼠的抗癲癇和神經(jīng)保護(hù)作用，并探討NR2B/CaMKII/CREB信號(hào)通

2、路對(duì)其抗癲癇及神經(jīng)保護(hù)作用的影響。
　　方法：
　　預(yù)先給予小鼠腹腔注射Gent（200mg/kg、400mg/kg、800mg/kg），30分鐘后腹腔注射Pilo（280mg/kg）并密切觀察小鼠行為學(xué)變化。給予Pilo后72小時(shí)進(jìn)行分子生物學(xué)及組織病理學(xué)檢測(cè)。
　　1.觀察Gent對(duì)Pilo誘導(dǎo)癲癇小鼠的抗癲癇及神經(jīng)保護(hù)作用
　　①行為學(xué)方法：給予Pilo后，觀察Gent對(duì)小鼠驚厥潛伏期、進(jìn)入癲癇持續(xù)狀態(tài)的時(shí)

3、間、驚厥率及存活率的影響。
　?、谀X電測(cè)量：給予Pilo后，觀察Gent對(duì)小鼠皮層腦電圖的變化，并對(duì)腦電圖的波幅及總功率進(jìn)行分析。
　?、劢M織病理學(xué)方法：給予Pilo后72小時(shí)，對(duì)小鼠大腦行Nissl染色和Fluoro jade B（FJB）染色，觀察Gent對(duì)小鼠海馬組織病理結(jié)構(gòu)變化的影響。
　　2.探討NR2B/CaMKII/CREB信號(hào)通路在Gent對(duì)Pilo誘導(dǎo)癲癇小鼠的抗癲癇及神經(jīng)保護(hù)作用的關(guān)系
　　①

4、運(yùn)用Western blot方法檢測(cè)Gent對(duì)小鼠海馬組織中Bax、Bcl-2、Caspase-3、NR2B、鈣/鈣調(diào)蛋白依賴(lài)性蛋白激酶（CaMKII）、p-CaMKII、cAMP反應(yīng)元件結(jié)合蛋白（CREB）與p-CREB蛋白含量的影響，分析海馬中Bax、Bcl-2、Caspase-3、NR2B、CaMKII和CREB對(duì)Gent鎮(zhèn)痛作用的影響。
　?、谶\(yùn)用q-PCR方法檢測(cè)Gent對(duì)小鼠海馬組織中NR2B mRNA、CaMKII

5、mRNA、CREB mR含量的影響。
　　結(jié)果：
　　1.龍膽苦苷對(duì)Pilo誘發(fā)癲癇小鼠的抗癲癇及神經(jīng)保護(hù)作用
　　龍膽苦苷各給藥組(400、800 mg/kg)與模型組比較，可顯著延長(zhǎng)癲癇潛伏期和進(jìn)入癲癇持續(xù)狀態(tài)時(shí)間(p<0.05，p<0.01)；龍膽苦苷(400、800 mg/kg)組與模型組比較，可顯著降低進(jìn)入癲癇持續(xù)狀態(tài)的比率和死亡率；與模型組比較，龍膽苦苷(400、800 mg/kg)組能顯著減少腦電圖的平均

6、波幅及總功率(p<0.05，p<0.01)；與模型組比較，龍膽苦苷(400、800 mg/kg)組可以減輕癲癇引起海馬CA1、CA2區(qū)的病理性損傷。
　　2.龍膽苦苷對(duì)Pilo誘發(fā)癲癇小鼠的抗癲癇及神經(jīng)保護(hù)作用與NR2B/CaMKII/CREB信號(hào)通路的關(guān)系
　　龍膽苦苷組(800mg/kg)與模型組相比較，可降低p-CaMKII、p-CREB、NR2B、Bax、Caspase-3蛋白含量在海馬組織的表達(dá)（p<0.05）,并