AG490對(duì)氯化鋰-匹羅卡品致癲癇星形膠質(zhì)細(xì)胞活化的影響.pdf

1、目的：探討匹羅卡品致癲癇狀態(tài)下大鼠海馬內(nèi)腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)及星形膠質(zhì)細(xì)胞的表達(dá)、增生規(guī)律，并探討JAK/STAT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在癲癇發(fā)作后對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞活化的影響。
　　 方法：應(yīng)用腹腔注射氯化鋰－匹羅卡品（PILO）的方法建立顳葉癲癇模型，應(yīng)用JAK/STAT 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路特異性抑制劑 AG490進(jìn)行腹腔注射建立干預(yù)模型組，應(yīng)用生理鹽水代替匹羅卡品進(jìn)行腹腔注射建立對(duì)照模

2、型組；用Western blot方法測(cè)定大鼠海馬勻漿后TNF-α表達(dá)的變化，免疫熒光化學(xué)方法對(duì)照觀察應(yīng)用AG-490阻滯JAK/STAT 通路后對(duì)大鼠海馬TNF-α與星形膠質(zhì)細(xì)胞活化的影響。
　　 結(jié)果：1.大鼠行為學(xué)觀察：生理鹽水對(duì)照組雄性大鼠沒(méi)有任何癇性發(fā)作。PILO 致癲癇模型組有 80.00％（32/40）的動(dòng)物達(dá) Racine分級(jí)Ⅳ級(jí)以上發(fā)作；10.00％（4/40）的雄性大鼠死亡；10.00％（4/40）的雄性大鼠未

3、達(dá)Racine分級(jí)Ⅳ級(jí)發(fā)作，模型成功率為90.00％；30天組中仍然有自發(fā)發(fā)作的有2只及25.00％（2/8）。AG490 干預(yù)組雄性大鼠Ⅳ 級(jí)以上發(fā)作的發(fā)生率為 75.00％（30/40）；死亡率為7.50％（3/40）；17.50％（7/40）的雄性大鼠未達(dá)Ⅳ 級(jí)發(fā)作，模型成功率為82.50％；30天時(shí)有Ⅳ 級(jí)以上發(fā)作僅7只。達(dá)到V 級(jí)發(fā)作占23只占76.67％（23/30）30天組中仍然有自發(fā)發(fā)作的有1只及12.50％（1/8），

4、Ⅳ級(jí)及以下發(fā)作同PILO 致癲癇模型組比較P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；其他P>0.05，沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 2．Western blotting檢測(cè)發(fā)現(xiàn)PILO模型組中，TNF-α在癲癇發(fā)作3小時(shí)時(shí)即較生理鹽水對(duì)照組開始增多，癲癇發(fā)作第3天 時(shí)達(dá)到最高峰，之后逐漸下降，至癲癇第發(fā)作30天蛋白表達(dá)水平仍比正常略高,30天時(shí)有III 級(jí)以上發(fā)作的比沒(méi)有發(fā)作的要高；AG490 干預(yù)組各時(shí)間點(diǎn)TNF-α表達(dá)均較 PILO組明顯減少。3

5、h組、12h組分別和24h、3d組相比有顯著性差異p<0.01,30d癲癇仍然有發(fā)作組和30d不發(fā)作組相比無(wú)顯著差異p>0.01
　　 3．雙重免疫熒光結(jié)果：有黃綠色顆粒者為陽(yáng)性染色，且可以看見(jiàn)陽(yáng)性顆粒在星形膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)的空間分布，AG490腹腔注射建立干預(yù)后，陽(yáng)性顆粒的星形膠質(zhì)細(xì)胞明顯減少,P<0.05，提示JAK/STAT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路可以促進(jìn)星形膠質(zhì)細(xì)胞活化。
　　 結(jié)論：應(yīng)用氯化鋰－匹羅卡品癲癇模型可以復(fù)制出與人類顳