群感效應(yīng)對(duì)紅曲霉洛伐他汀和紅曲色素合成的影響及調(diào)控機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　最近的研究表明一種被稱為群感效應(yīng)現(xiàn)象在提高微生物次生代謝產(chǎn)物量方面具有較大的應(yīng)用前景。本研究中，我們探討亞油酸作為群感效應(yīng)信號(hào)分子氧脂素的前體對(duì)人紅曲霉洛伐他汀和紅色素的合成影響及其調(diào)控機(jī)理。
　　方法：
　　分別采用高效液相色譜法和紫外分光光度法檢測(cè)洛伐他汀和紅色素的產(chǎn)量，探討亞油酸對(duì)紅色素和洛伐他汀合成濃度-時(shí)間-產(chǎn)量關(guān)系；通過Real-Time PCR法檢測(cè)亞油酸對(duì)紅曲霉洛伐他汀合成調(diào)控基因mkH和洛

2、伐他汀合成基因mkA濃度-時(shí)間-表達(dá)量的關(guān)系；酶聯(lián)免疫吸附法及比色法分別檢測(cè)亞油酸對(duì)紅曲霉G蛋白偶聯(lián)信號(hào)通路中環(huán)腺苷酸和胞內(nèi)鈣離子濃度-時(shí)間-含量的關(guān)系；非放射性蛋白激酶檢測(cè)法檢測(cè)蛋白激酶A、蛋白激酶C和酶聯(lián)免疫法檢測(cè)磷脂酶C濃度-時(shí)間-活性的關(guān)系。
　　結(jié)果：
　　亞油酸對(duì)紅曲霉次級(jí)代謝產(chǎn)物紅曲色素和洛伐他汀的產(chǎn)量均有較高的影響，并且呈一定的濃度依賴性。高濃度的亞油酸不利于色素的產(chǎn)生，較低濃度的亞油酸有利于紅曲色素的產(chǎn)生。

3、亞油酸濃度為64μM的實(shí)驗(yàn)組得到較高的紅曲色素產(chǎn)量，在第十三天產(chǎn)量達(dá)5.6U/mL,相比對(duì)照組增長(zhǎng)了27％；較高濃度的亞油酸有利于洛伐他汀的產(chǎn)生，512μM濃度的亞油酸實(shí)驗(yàn)組獲得較高的洛伐他汀的產(chǎn)量，在第十三天產(chǎn)量達(dá)13.2mg/g,與對(duì)照組相比增長(zhǎng)了26%。
　　Real-Time PCR的結(jié)果表明較高濃度亞油酸可提高mkA基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平，而在低濃度亞油酸中mkA基因的表達(dá)受到抑制。mkA基因最高的表達(dá)出現(xiàn)在512μM組的第

4、九天，表達(dá)差異相比對(duì)照組達(dá)5.36倍；mkA基因最低表達(dá)出現(xiàn)在64μM組的第七天，只是對(duì)照組的0.27倍。在全部的亞油酸添加組中，調(diào)控基因mkH在培養(yǎng)前中期有不同程度的較高水平的表達(dá)，最大的差異出現(xiàn)在第九天，分別是64μM組的11.8倍和512μM的7.41。
　　亞油酸可起引cAMP-PKA途徑中cAMP濃度的的增加，并且cAMP濃度維持在較高水平，呈一定的濃度依賴性，而PKA的活性也有顯著的升高，PKA的活性同樣維持在較高水平

5、，活性高低呈亞油酸濃度依賴性的升高，這與cAMP的變化相一致；磷脂酰肌醇信號(hào)通路中PKC的活性有一定的升高，而胞內(nèi)鈣離子濃度和磷脂酶C活性相比對(duì)照組沒有顯著的變化。
　　結(jié)論：
　　外源添加亞油酸可改變紅曲霉產(chǎn)生色素的過程；在一定范圍內(nèi)，色素的產(chǎn)量與亞油酸添加濃度成反比，洛伐他汀的產(chǎn)量與亞油酸添加濃度成正比，洛伐他汀和色素的產(chǎn)量成一定的競(jìng)爭(zhēng)性。洛伐他汀合成基因mkA的轉(zhuǎn)錄水平的變化與洛伐他汀的合成量呈正比性相關(guān)，而與色素產(chǎn)量