GRP78在糖尿病大鼠逼尿肌細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激中的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：
　　通過探討GRP78在糖尿病大鼠逼尿肌細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激病變發(fā)生發(fā)展，特別是逼尿肌細胞凋亡過程中的作用和機制，揭示GRP78在糖尿病大鼠逼尿肌細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激病變發(fā)生發(fā)展中的動態(tài)演變規(guī)律變化，為DCP的病因?qū)W研究提供重要的實驗依據(jù)。
　　方法：
　　在本研究中，我們選取GRP78作為ERS的標志性因子，取健康清潔級成年雌性Sprague-Dawley大鼠50只隨機平均分為4組糖尿病組和1組正常對照組。糖尿病組采用一

2、次注射法經(jīng)腹腔注射鏈脲佐菌素（STZ）50 mg/k g,注射后72小時行鼠尾靜脈血糖濃度＞16.7 mmo l/L為模型成功。分別在4周、8周、12周、16周處死大鼠，切除膀胱組織，并去除周圍脂肪和結(jié)締組織，分別采用tunel法測定逼尿肌細胞凋亡率和電鏡下觀察逼尿肌細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)形態(tài)學(xué)變化。用RT-PCR技術(shù)檢測及Western-Blot技術(shù)動態(tài)研究糖尿病大鼠逼尿肌細胞凋亡水平與GRP78表達情況的相互關(guān)系，并進行所有數(shù)據(jù)的統(tǒng)計學(xué)分析。<

3、br>　　結(jié)果：
　　糖尿病大鼠造模成功即出現(xiàn)多飲、多食、排尿增多，體型明顯消瘦，毛發(fā)變黃變硬，光澤度下降，出現(xiàn)嗜睡對外界條件反應(yīng)遲鈍，個別糖尿病大鼠四肢潰爛，對疼痛不敏感，對照組大鼠飲食狀況正常；糖尿病各組凋亡率隨著時間的遞增而升高,12w時升高趨勢明顯，凋亡趨勢呈時間依賴性；在電鏡下糖尿病組逼尿肌細胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)細胞核周圍大量內(nèi)質(zhì)網(wǎng)無序排列，體積增大，為白色不規(guī)則空泡樣結(jié)構(gòu)，漿膜附著核糖小體；RT-PCR檢測結(jié)果顯示,4w組和8

4、w組明顯高于對照組，12w組表達水平最高，是對照組的8.87倍，而16w組表達水平較12w有所下降。Western–blot檢測結(jié)果顯示，GRP78蛋白表達水平4w組較對照組出現(xiàn)升高，8w組表達水平最高，是對照組的1.45倍，而12w組和16w組較8w組明顯下降。
　　結(jié)論：
　　DCP逼尿肌細胞凋亡與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激密切相關(guān)，其中GRP78表達水平的改變是至逼尿肌細胞凋亡的重要病變機制，隨著糖尿病病程的進展，GRP78與DCP有