HMGB1通過調(diào)控內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白GRP78和CHOP的表達對大鼠腦缺血再灌注損傷的影響.pdf

1、目的：研究HMGB1對大鼠腦缺血再灌注后神經(jīng)功能評分，梗死體積，病理學(xué)改變以及缺血半暗帶內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激（ERS）相關(guān)凋亡蛋白GRP78和CHOP表達的影響。
　　方法：成年健康SD雄性大鼠120只，隨機分成4組，分別為假手術(shù)組（Sham），大腦中動脈閉塞缺血再灌注損傷組（MCAO）模型組，甘草甜素干預(yù)組（GL組），丙酮酸乙酯干預(yù)組（EP組），其中24只于再灌注24h提取腦組織用于TTC染色檢測梗死體積，剩余的96只于再灌注6h、12h

2、、24h、48h提取腦組織，每個時間點每組6只。線栓法制備大鼠MCAO模型；GL組和EP組于再灌注后1h按照50mg/kg進行腹腔注射，此后每隔12h注射一次。假手術(shù)組及模型組注射同等量的生理鹽水，缺血1h再灌注，于相應(yīng)時間點觀察大鼠的行為學(xué)表現(xiàn)，進行神經(jīng)功能評分，然后斷頭取腦，石蠟切片HE染色觀察腦組織病理學(xué)改變，免疫組化法觀察缺血半暗帶HMGB1、GRP78和CHOP蛋白表達。剩余的24只于缺血1h，再灌注24h直接取腦，TTC染色

3、觀察各組大鼠腦梗死體積。所獲得數(shù)據(jù)采用統(tǒng)計軟件分析。
　　結(jié)果：⑴Sham組無神經(jīng)系統(tǒng)損害癥狀，評分為0分；模型組于缺血1h，再灌注6h、12h、24h均有神經(jīng)功能缺損癥狀，評分呈逐漸增加趨勢，48h評分稍有下降；GL組及EP組神經(jīng)功能評分于各個時間點較模型組均有減輕(P<0.05)，兩干預(yù)組間對比差別不顯著(P>0.05)。⑵缺血1h再灌注后24h腦組織經(jīng)過2％TTC染色后，未梗死腦組織染成紅色，梗死灶成白色。Sham組腦組織呈

4、紅色，顏色均勻，提示無梗死灶；模型組可見右側(cè)腦組織有不同面積的白色，提示腦組織局部梗死；GL組及EP組與模型組相比，白色區(qū)域范圍縮小，提示腦梗死體積明顯減小(P<0.05)，兩干預(yù)組之間無明顯差異（P>0.05）。⑶Sham組大鼠皮層組織結(jié)構(gòu)未見明顯異常變化；模型組大鼠缺血半暗帶組織呈現(xiàn)大量壞死灶，神經(jīng)細胞數(shù)量減少，胞核固縮，著色加深；而GL組及EP組在各個時間點與模型組相比，多數(shù)神經(jīng)元形態(tài)改變較輕，胞體基本完整。⑷免疫組織化學(xué)染色結(jié)果

5、：再灌注48h缺血HMGB1蛋白表達：Sham組僅少量HMGB1表達于胞核，無明顯胞漿表達，模型組HMGB1陽性細胞數(shù)目增多且可見大量胞漿表達，與假手術(shù)組相比差異明顯(P<0.05)；GL組及EP組與模型組相比表達減少，特別是胞漿內(nèi)表達明顯減少(P<0.05)；表明GL及EP干預(yù)明顯抑制了HMGB1的表達及由胞核向胞漿的轉(zhuǎn)位，而兩干預(yù)組對比無明顯差異；GRP78蛋白表達：GRP78是抗凋亡蛋白，各組都有一定數(shù)量的陽性表達；Sham組右側(cè)

6、大腦供血區(qū)GRP78陽性細胞很少量表達；模型組再灌注6h，即有GRP78陽性細胞表達增多，12h最多，24h后逐漸下降，表達量均顯著高于sham組(P<0.05)；GL組及EP組6h、12h、24h、48h, GRP78的表達顯著高于模型組(P<0.05)，兩干預(yù)組間對比差異不明顯；CHOP蛋白表達：CHOP是促凋亡蛋白，表達于胞核。Sham組缺血半暗帶未見明顯陽性表達；模型組于再灌注6h表達增加，24h達高峰，48h表達有所下調(diào)；GL

7、組及EP組各時間點模型組相比表達顯著降低(P<0.05)；兩干預(yù)組間比較差別不顯著(P>0.05)。
　　結(jié)論：①腦缺血再灌注誘導(dǎo)了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，上調(diào)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志物GRP78和CHOP蛋白表達。②HMGB1抑制劑甘草甜素及丙酮酸乙酯干預(yù)抑制了腦缺血再灌注損傷后缺血半暗帶HMGB1的表達，上調(diào)GRP78、下調(diào)CHOP的表達，縮小腦梗死體積，減輕缺血側(cè)腦組織損傷程度，改善行為學(xué)表現(xiàn)，具有腦保護作用。③推測HMGB1在腦缺血再灌注損傷中