噪聲應(yīng)激對(duì)高血壓大鼠心肌內(nèi)質(zhì)網(wǎng)GRP78和CHOP表達(dá)的影響與心肌重構(gòu)的關(guān)系及藥物干預(yù)的研究.pdf

1、研究背景及目的：高血壓是一種綜合癥，廣泛的參與對(duì)機(jī)體的損害過(guò)程。因此，減少或者消除高血壓對(duì)靶器官的損害有十分重要的臨床意義。高血壓可引起心臟損害并導(dǎo)致心肌重構(gòu)，并且是心血管疾病發(fā)生發(fā)展的一個(gè)重要的危險(xiǎn)因素。但其發(fā)病機(jī)制比較復(fù)雜，目前尚不十分清楚。研究表明,壓力過(guò)負(fù)荷的高血壓、自身免疫性心肌病、糖尿病性心肌病、血管活性物質(zhì)異常均可致心肌重構(gòu)，并在這些過(guò)程中出現(xiàn)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激（ERS）反應(yīng)，提示ERS反應(yīng)可能與心肌重構(gòu)的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。但是，噪聲

2、應(yīng)激對(duì)大鼠血壓和心肌重構(gòu)有何影響，與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激有何關(guān)系，目前還不明確。鈣離子(calciumin)超載是促使心肌細(xì)胞凋亡的重要誘因之一，鈣離子從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中釋放和其在胞漿中的濃度均與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)的細(xì)胞死亡有關(guān)。研究表明：以拉西地平(Lacidipine)為代表的大多數(shù)鈣離子拮抗劑(Calciumchannelblocker,CCB)均可有效降低高血壓心肌細(xì)胞凋亡的作用。但是CCB類藥物拉西地平降低高血壓及減輕心肌細(xì)胞凋亡是否有ERS的參與

3、，目前仍不明確。
　　本課題通過(guò)建立噪聲應(yīng)激高血壓大鼠模型，觀察ERS重要相關(guān)因子葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(glucose-regulatedprotein78,GRP78)和C/EBP同源蛋白(C/EBPhomologousprotein,CHOP)在噪聲應(yīng)激高血壓大鼠心肌中的表達(dá)及心臟結(jié)構(gòu)和功能的變化；研究高血壓與ERS的關(guān)系及其作用機(jī)制；探討應(yīng)用鈣離子拮抗劑(Calciumchannelblocker,CCB)減少高血壓心肌細(xì)胞凋

4、亡的ERS分子機(jī)制，旨在尋找噪聲應(yīng)激高血壓與ERS的內(nèi)在聯(lián)系，為最終防治高血壓對(duì)心臟的損害提供新的理論依據(jù)和治療靶點(diǎn)。
　　研究方法：本研研究以大鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，通過(guò)噪聲應(yīng)激建立高血壓大鼠模型。采用頸動(dòng)脈插管、B超檢測(cè)、稱全心及左室質(zhì)量記算左室重量指數(shù)免疫組化法、Western-blot法及TUNNEL法等實(shí)驗(yàn)技術(shù)和方法，觀察：（1）噪聲應(yīng)激過(guò)程中大鼠的平均動(dòng)脈壓（MAP）、室間隔厚度（IVST）、左室后壁厚度（LPWT）、射血分?jǐn)?shù)

5、（EF值）、E/A比值（E/A）及左室重量指數(shù)（LVWI）；（2）噪聲應(yīng)激對(duì)大鼠心肌細(xì)胞GRP78及CHOP蛋白表達(dá)及含量的影響；（3）噪聲應(yīng)激對(duì)大鼠心肌細(xì)胞凋亡率的影響；（4）拉西地平對(duì)噪聲應(yīng)激高血壓大鼠心肌細(xì)胞GRP78、CHOP表達(dá)及心肌細(xì)胞凋亡率的影響，以及對(duì)心臟結(jié)構(gòu)和功能的影響。
　　研究結(jié)果：（1）噪聲應(yīng)激2w、4w、6w及8w亞組平均動(dòng)脈壓（MAP）分別為142.32±8.89mmHg、166.90±8.32mmHg

6、、174.23±6.26mmHg及178.56±9.03mmHg，均分別高于相應(yīng)對(duì)照組（126.65±8.89mmHg、129.65±8.86mmHg、130.65±9.87mmHg、132.65±9.87mmHg），并有統(tǒng)記學(xué)意義（P<0.05）。且隨著應(yīng)激時(shí)間的延長(zhǎng)，血壓值逐淅升高；（2）隨著噪聲應(yīng)激時(shí)間的延長(zhǎng)，噪聲組與對(duì)照組比較，IVST和LPWT均在噪聲應(yīng)激4W亞組顯著增大。隨著噪聲應(yīng)激時(shí)間的延長(zhǎng)，IVST和LPWT均逐漸增大,

7、噪聲應(yīng)激4W、6W及8W亞組的IVST分別較相應(yīng)對(duì)照組增大29％、33％及38％（p<0.05），4W、6W及8W亞組的LPWT分別較相應(yīng)對(duì)照組增大29％、29％及33％（p<0.05）；（3）噪聲應(yīng)激2W、4W、6W及8W亞組的LVWI均顯著高于相應(yīng)的對(duì)照組，噪聲組LVWI呈遞增的趨勢(shì)，分別較相應(yīng)對(duì)照組增高23％、23％、30％和26％（p<0.05）；（4）噪聲2W亞組EF值與對(duì)照組無(wú)明顯差異，4W亞組開始低于對(duì)照組，6W、8W亞組

8、逐漸降低，且均顯著低于相應(yīng)的對(duì)照組（P<0.05）；4W、6W及8W亞組的E/A值隨著時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸減小，均比相應(yīng)的對(duì)照組顯著減小，并有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）；（5）噪聲應(yīng)激噪聲應(yīng)激2W、4W、6W及8W亞組GRP78均有表達(dá)，光密度OD值分別為0.50±0.032、0.81±0.035、0.61±0.033及0.52±0.034，均高于相應(yīng)對(duì)照組（OD值分別為0.20±0.030、0.22±0.028、0.21±0.032及0.2

9、3±0.031），并有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05），4W達(dá)到最高值；（6）噪聲應(yīng)激2W亞組和相應(yīng)的對(duì)照亞組CHOP蛋白表達(dá)均有陽(yáng)性表現(xiàn)，其OD值分別為0.45±0.05和0.14±0.05，二者比較有顯著的差異（p<0.01）。噪聲4W、6W及8W亞組的OD值分別為0.50±0.05、0.62±0.04及0.71±0.06，均顯著高于相應(yīng)的對(duì)照組0.15±0.06、0.17±0.04及0.19±0.05的OD值，并有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.0

10、5），隨著應(yīng)激時(shí)間的延長(zhǎng)其OD值逐漸增加，噪聲應(yīng)激8W亞組的OD值達(dá)最高值。（7）噪聲應(yīng)激2W、4W、6W及8W亞組GRP78的蛋白表達(dá)量分別為0.51±0.03、0.76±0.03、0.61±0.03及0.52±0.05；對(duì)照組GRP78蛋白的2W、4W、6W及8W亞組表達(dá)量分別為0.26±0.06、0.28±0.06、0.29±0.04及0.27±0.05。噪聲2W、4W、6W、8W亞組與相應(yīng)的對(duì)照組比較有非常顯著的差異（p<0.0

11、1），4W表達(dá)達(dá)最高值，8W表達(dá)減弱，（8）噪聲組CHOP蛋白2W、4W、6W及8W蛋白表達(dá)含量分別為0.26±0.03、0.38±0.02、0.49±0.04及0.61±0.03顯著高于相應(yīng)的對(duì)照組0.17±0.02、0.18±0.02、0.22±0.03及0.23±0.02，并有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）。隨著噪聲應(yīng)激時(shí)間的延長(zhǎng)，心肌組織中CHOP蛋白含量呈遞增的趨勢(shì)，8W達(dá)最高值。（9）噪聲應(yīng)激2W亞組和對(duì)照2W亞組均有少量的凋亡

12、細(xì)胞，但噪聲2W組心肌細(xì)胞凋亡率（11.72±0.82）％高于對(duì)照2W組心肌細(xì)胞凋亡率（5.34±0.75）％，并有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）。噪聲4W、6W及8W亞組心肌細(xì)胞凋亡率分別為（15.92±0.74）％、（26.27±0.78）％及（33.56±0.80）％，均高于相應(yīng)的對(duì)照4W（12.16±0.69）％、6W（13.29±0.73）％及8W（18.22±0.83）％亞組的心肌細(xì)胞凋亡率，（p<0.05）。隨著噪聲應(yīng)激時(shí)間的

13、延長(zhǎng)心肌細(xì)胞凋亡率逐漸增加。（10）對(duì)照組、噪聲組及噪聲+拉西地平組的MAP分別為118.65±9.84mmHg、174.23±6.26mmHg及139.23±8.14mmHg，噪聲+拉西地平組的MAP低于噪聲組，高于對(duì)照組（p<0.05）。（11）噪聲應(yīng)激6w后，噪聲組和噪聲+拉西地平組與對(duì)照組比較，IVST及PWT均有差異（p<0.05）。噪聲組與噪聲+拉西地平組比較噪聲+拉西地平組的IVST及PWT均低于噪聲組（p<0.05）。（

14、12）噪聲應(yīng)激6w后，噪聲+拉西地平組的GRP78、CHOP表達(dá)及心肌細(xì)胞凋亡率均高于對(duì)照組，低于噪聲組，并有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）。
　　研究結(jié)論：(1)噪聲應(yīng)激可以引起心肌細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激。（2）ERS通過(guò)誘導(dǎo)GRP78和CHOP的表達(dá)參與介導(dǎo)了高血壓形成過(guò)程中細(xì)胞保護(hù)性反應(yīng)和心肌細(xì)胞凋亡反應(yīng)。(3)隨著血壓持續(xù)性升高導(dǎo)致CHOP在心肌中超表達(dá)，ERS參與心肌細(xì)胞凋亡這一病理過(guò)程，并使心肌內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)發(fā)生失衡。(4)鈣

15、離子拮抗劑能夠通過(guò)降低心肌組織ERS水平，減少高血壓心肌細(xì)胞凋亡，從而對(duì)心肌細(xì)胞起保護(hù)作用，其作用機(jī)制可能與其抑制ERS凋亡信號(hào)分子CHOP的表達(dá)有關(guān)。
　　綜上所述，不難看出噪聲可以引起心肌細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，導(dǎo)致內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激保護(hù)性因子GRP78和損傷性因子CHOP表達(dá)失衡，進(jìn)而造成心肌細(xì)胞的損害。心肌細(xì)胞的損害可引起心臟收縮及舒張功能障礙，使血液動(dòng)力學(xué)改變，這可能是噪聲引起高血壓機(jī)制之一。ERS反應(yīng)穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)的失衡，可啟動(dòng)CHOP介導(dǎo)