bFGF通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激信號(hào)通路對(duì)小鼠全腦缺血再灌注保護(hù)作用機(jī)制的研究.pdf

1、背景及目的：
　　 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激由于可以激活未折疊蛋白反應(yīng)等信號(hào)途徑，在細(xì)胞生長(zhǎng)、分化及凋亡中起到非常重要的作用。盡管早期的激活未折疊蛋白反應(yīng)可以保護(hù)細(xì)胞免受錯(cuò)誤折疊蛋白的毒害，但是過度及持續(xù)的激活未折疊蛋白反應(yīng)會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡。bFGF作為一種神經(jīng)保護(hù)因子具有神經(jīng)保護(hù)作用及保護(hù)神經(jīng)元各種損失。我們研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)bFGF可以保護(hù)小鼠缺血再灌注損傷，進(jìn)一步研究bFGF的作用機(jī)制。
　　 (1) bFGF可以明顯改善小鼠腦缺血再灌

2、注的損失，提高行為學(xué)能力，減少再灌注引起的神經(jīng)元凋亡。抑制缺血再灌注引起的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激上調(diào)。
　　 (2) bFGF對(duì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的抑制作用是通過激活PI3K/Akt和ERK1/2這兩個(gè)通路來實(shí)現(xiàn)的。
　　 方法及結(jié)果：
　　 (1)用動(dòng)脈血管夾夾閉C57BL/6J小鼠雙側(cè)頸動(dòng)脈20分鐘后松開造小鼠腦缺血再灌注模型。隨機(jī)分成假手術(shù)組、模型組及鼻腔給bFGF組，按照不同時(shí)間點(diǎn)又分為6h，1d，3d三組，采用開發(fā)箱實(shí)驗(yàn)評(píng)

3、價(jià)小鼠行為功能。發(fā)現(xiàn)給予bFGF組各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的行動(dòng)總路程明顯要長(zhǎng)于模型組，說明bFGF能改善缺血再灌注造成的行動(dòng)能力下降。然后取腦組織分別用于石蠟包埋切片染色、Westernblot以及其他指標(biāo)的檢測(cè)，HE結(jié)果表明bFGF可以減少皮層和海馬CA1區(qū)的神經(jīng)元丟失。免疫組化結(jié)果表明bFGF可以抑制缺血再灌注引起的CHOP,caspase-12內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白的上調(diào)。Western blot結(jié)果也進(jìn)一步證實(shí)了bFGF對(duì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白的抑制作用。

4、在體外實(shí)驗(yàn)中，我們用H2O2作用PC12細(xì)胞模型體內(nèi)氧化損傷模型，發(fā)現(xiàn)H2O2作用后細(xì)胞凋亡率上升，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激蛋白相關(guān)蛋白CHOP，caspase-12，ATF-6，XBP-1上調(diào)，而bFGF可以抑制細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激蛋白的上調(diào)并減少凋亡率。
　　 (2)在上述結(jié)果的基礎(chǔ)上，為了探索bFGF是如何抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的，結(jié)合一些文獻(xiàn)報(bào)道，發(fā)現(xiàn)在動(dòng)物腦組織標(biāo)本中bFGF可以上調(diào)PI3K/Akt和ERK1/2這兩個(gè)通路，并在PC12細(xì)胞上得到

5、了進(jìn)一步的證實(shí)。因此，我們引入了LY294002和U0126分別是PI3K/Akt和ERK1/2通路的抑制劑，結(jié)果顯示當(dāng)分別阻斷這兩個(gè)通路時(shí)，bFGF對(duì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白的抑制作用都被部分抑制了。流式結(jié)果也顯示，當(dāng)加入抑制劑后bFGF對(duì)H2O2造成的PC12細(xì)胞凋亡保護(hù)作用降低。
　　 結(jié)論：
　　 bFGF通過激活PI3K/Akt和ERK1/2兩個(gè)通路來抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白CHOP/GADD153、caspase-1