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文檔簡介
1、目的:探討內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與線粒體在高血糖加重腦缺血再灌注損傷中的聯(lián)合作用。
方法:實驗分為正常對照組(NC)、正常血糖缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖組(N-OGD/R)和高血糖缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖組(H-OGD/R)。采用腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)的方法構(gòu)建高血糖大鼠動物模型,繼而通過體外海馬腦片缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖培養(yǎng)的方法來模擬大鼠腦缺血再灌注模型。采用碘化丙啶(PI)染色熒光顯微鏡下計數(shù)死亡神經(jīng)細(xì)胞數(shù)目,酶聯(lián)接免疫吸附法(Enzyme
2、-Linked Immunosorbnent Assay,ELISA)檢測海馬腦片培養(yǎng)液中乳酸脫氫酶(LDH)釋放量,免疫組織化學(xué)方法檢測海馬腦片中胱天蛋白酶(Caspase)-3、Caspase-9、Caspase-12及細(xì)胞色素C(Cyt C)蛋白的表達(dá),以及用熒光定量RT-PCR技術(shù)檢測腦片中葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78mRNA(GRP78mRNA)和DNA損傷誘導(dǎo)基因153mRNA(GADD153mRNA)的相對表達(dá)量。
結(jié)
3、果:(1)死亡細(xì)胞計數(shù):NC組、N-OGD/R組與H-OGD/R組的死亡細(xì)胞計數(shù)分別為(10.07±4.94),(16.58±7.65),(25.96±11.2),三組陽性細(xì)胞分布差異有統(tǒng)計學(xué)意義(H41.48,P＜0.01)。與NC組相比,H-OGD/R組的死亡細(xì)胞計數(shù)明顯增多(F16.920,P＜0.01)。(2)培養(yǎng)液中LDH含量:NC組、N-OGD/R組與H-OGD/R組分別為(4.285±0.607),(5.736±0.495
4、),(6.323±0.499),與NC組相比,H-OGD/R組的LDH含量明顯升高(F45.846,P＜0.01)。(3)免疫組織化學(xué)檢測Caspase-3、Caspase-9、Caspase-12及CytC表達(dá):NC組、N-OGD/R組與H-OGD/R組Caspase-3平均光密度分別為(0.335±0.009),(0.343±0.005),(0.348±0.004),與NC組相比,H-OGD/R組明顯升高(F13.398,P＜0.0
5、1);NC組、N-OGD/R組與H-OGD/R組Caspase-9平均光密度分別為(0.307±0.004),(0.316±0.006),(0.3220.007),與NC組相比,H-OGD/R組明顯升高(F16.052,P＜0.01);NC組、N-OGD/R組與H-OGD/R組Caspase-12平均光密度分別為(0.343±0.004),(0.350±0.005),(0.354±0.005),與NC組相比,H-OGD/R組明顯升高(F
6、16.052,P＜0.01);NC組、N-OGD/R組與H-OGD/R組CytC平均光密度分別為(0.315±0.007),(0.323±0.004),(0.328±0.005),與NC組相比,H-OGD/R組明顯升高(F15.444,P＜0.01)。(4)熒光定量RT-PCR技術(shù)檢測GRP78 mRNA和GADD153 mRNA: NC組、N-OGD/R組與H-OGD/R組GRP78 mRNA定量分別為(1.078±0.196),(1
7、.742±0.485),(2.350±0.522),與NC組相比,H-OGD/R組明顯升高(F13.347,P＜0.01);NC組、N-OGD/R組與H-OGD/R組GADD153定量分別為(1.036±0.278),(1.757±0.466),(2.567±0.713),與NC組相比,H-OGD/R組明顯升高(F13.3151,P＜0.01)。
結(jié)論:高血糖可加重腦缺血再灌注損傷,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激及線粒體在高血糖加重腦缺血再灌
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