冠心病人血清外泌體miRNA表達(dá)譜分析.pdf

1、目的:外泌體(exosome)是由細(xì)胞分泌的一種囊泡樣物質(zhì)，直徑在20-200nm，可通過在細(xì)胞、組織間傳遞蛋白及各種遺傳物質(zhì)參與血管生長、細(xì)胞增殖、腫瘤細(xì)胞侵襲與轉(zhuǎn)移、免疫應(yīng)答、抗原提呈等多種生理或病理反應(yīng)，研究發(fā)現(xiàn)exosome包含有微小RNA(miRNA)，由于exosome所提供的良好保護(hù)性，使得外泌體miRNA(exosomal miRNA)在人體液中有很好的穩(wěn)定性。本研究嘗試分析冠心病患者血清中的exosomal miRNA

2、的表達(dá)情況，試圖找出對冠心病有診斷意義的miRNA。
　　方法:將入院患者依據(jù)臨床診斷分為急性心梗組（10人）、不穩(wěn)定心絞痛組(10人)、穩(wěn)定性心絞痛（10人），并選擇健康成人（10人）為對照組，空腹抽取靜脈血（心?；颊甙l(fā)病12小時取血）分離出血清，提取exosome，對exosome進(jìn)行透射電鏡觀察和nanosight進(jìn)行粒徑測量以確定提取效果，提取exosomal RNA并測量含量、分子量分布，建立exosomal miRNA

3、的cDNA文庫并純化，對cDNA文庫進(jìn)行鑒定后進(jìn)行高通量測序，對測序結(jié)果進(jìn)行分析。
　　結(jié)果:電鏡下觀察exosome為囊泡狀，大小、分布不均，直徑在30-200nm，其外層為脂質(zhì)包裹，粒徑測量結(jié)果顯示exosome平均粒徑129 nm，混懸液濃度8.99×108/ml; Agilent2100測量各樣品exosomal RNA在20到30nt處有較高分布，測量純化后的cDNA峰值在146bp左右，符合miRNA測序要求。測序結(jié)果

4、由信息生物學(xué)分析顯示，41個miRNA文庫，與已知miRNA庫中相符的miRNA數(shù)量分別為AMI組915個、UA組859個、SCAD組775個、Health組822個，各組樣品中勻以hsa-miR-451b、hsa-miR-451a、hsa-mir-486-1、hsa-mir-486-2、hsa-miR-486-5p、hsa-miR-486-3p表達(dá)量較多，與對健康對照組相比急性心梗組患者血清exosome中miR-146b-5p表達(dá)水