小鼠-大鼠異種心臟移植miRNA表達(dá)譜分析.pdf

1、目的：研究小鼠-大鼠異種異位心臟移植后供心miRNA表達(dá)譜的變化,為有效控制異種移植排斥反應(yīng)奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　 方法：
　　 1.采用改良Heron套袖法建立小鼠-小鼠/大鼠異位心臟移植模型,將小鼠心臟移植到受體右側(cè)頸部。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物包括同系對(duì)照組、異種24h組和異種停跳組,每組含受體動(dòng)物8只。
　　 2.試劑盒法分離提取RNA,Cy5標(biāo)記所提取總RNA中的miRNA,濃縮標(biāo)記樣品進(jìn)行miRNA芯片雜交,使用Axo

2、n GenePix4000B Microarray Scanner進(jìn)行圖像掃描,篩選出異種心臟移植排斥反應(yīng)中差異表達(dá)顯著的miRNA。
　　 3.TargetScan軟件預(yù)測(cè)差異表達(dá)顯著的miRNA靶基因,尋找與異種移植排斥反應(yīng)發(fā)生相關(guān)的基因。
　　 4.選取雜交結(jié)果中差異表達(dá)顯著的miR-146a、miR-155和miR-451進(jìn)行相對(duì)定量研究,通過(guò)TaqMan miRNA Assays技術(shù)對(duì)三組樣本進(jìn)行檢測(cè),驗(yàn)證芯片

3、結(jié)果。
　　 結(jié)果：
　　 1.模型建立練習(xí)階段、穩(wěn)定階段和成熟階段手術(shù)成功率分別為53.33％、85.71％和92.31％,3個(gè)階段手術(shù)成功率相比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異且后兩階段成功率高于練習(xí)階段。
　　 2.異種24h組和對(duì)照組芯片雜交結(jié)果顯示24個(gè)miRNA差異表達(dá)顯著,其中11個(gè)表達(dá)顯著下調(diào),13個(gè)表達(dá)顯著上調(diào)。
　　 3.異種停跳組和對(duì)照組芯片雜交結(jié)果顯示25個(gè)miRNA差異表達(dá)顯著,其中12個(gè)表達(dá)顯

4、著下調(diào),13個(gè)表達(dá)顯著上調(diào)。
　　 4.異種停跳組和異種24h組芯片雜交結(jié)果顯示6個(gè)miRNA差異表達(dá)顯著,其中5個(gè)miRNA變化趨勢(shì)一致,1個(gè)miRNA變化趨勢(shì)相反。
　　 5.芯片雜交結(jié)果中差異表達(dá)顯著的miR-146a、miR-155和miR-451進(jìn)行相對(duì)定量研究,與對(duì)照組相比較結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,且3個(gè)miRNA的變化倍數(shù)符合芯片分析的結(jié)果。
　　 結(jié)論：
　　 1.采用改良Heron套袖法建立

5、小鼠-小鼠/大鼠異位心臟移植模型,此方法操作簡(jiǎn)便、易于掌握,是研究異種心臟移植排斥反應(yīng)的良好動(dòng)物模型。
　　 2.在異種心臟移植排斥反應(yīng)中出現(xiàn)多個(gè)miRNA顯著的差異表達(dá),涉及免疫、腫瘤的發(fā)生、胰島素的合成與代謝、神經(jīng)系統(tǒng)生理功能、細(xì)胞增殖、血管生成等多個(gè)方面,并廣泛參與基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控。
　　 3.在小鼠-大鼠異種心臟移植排斥反應(yīng)中miR-146a和miR-155同時(shí)出現(xiàn)高表達(dá),miR-451出現(xiàn)顯著低表達(dá),說(shuō)明它們參與