狂犬病病毒感染小鼠脊髓的miRNA表達(dá)譜分析及其相互作用的初步探索.pdf

1、狂犬病病毒(Rabies virus,RV)是彈狀病毒科狂犬病病毒屬的成員,是一類高度嗜神經(jīng)性病毒,能導(dǎo)致所有溫血?jiǎng)游锔咧滤佬约膊?。目前狂犬病的致病機(jī)理尚未清楚,無(wú)治療方法,只能通過(guò)加強(qiáng)疫苗預(yù)防予以控制,因此深入研究其致病機(jī)制,尋找新的途徑來(lái)預(yù)防和治療尤為重要。
　　miRNA是一類內(nèi)源性、長(zhǎng)約為21-23 nt的非編碼蛋白的單鏈小分子RNA,通過(guò)與靶基因完全和不完全配對(duì)起到降解mRNA或抑制mRNA翻譯的功能,是一類重要的基因調(diào)

2、節(jié)子。它在機(jī)體的基因表達(dá)調(diào)控、細(xì)胞分化、細(xì)胞凋亡及抗病毒防御中發(fā)揮著重要作用。
　　本實(shí)驗(yàn)用正常和感染了狂犬病病毒 GX01的小鼠脊髓組織抽提總RNA,構(gòu)建Small RNA文庫(kù)并上機(jī)測(cè)序分析后,獲得病毒感染前后小鼠脊髓 miRNA的表達(dá)譜,其中表達(dá)上調(diào)3倍以上的有4個(gè):miR-34a-3p、miR-155-5p、miR-223-3p和miR-223-5p;表達(dá)下調(diào)3倍以上的只有1個(gè)miR-193b-5p。對(duì)這5個(gè)差異表達(dá)的miR

3、NA進(jìn)行靶基因預(yù)測(cè)后再進(jìn)行KEGG pathway分析,同時(shí)也用計(jì)算機(jī)預(yù)測(cè)并驗(yàn)證獲得了139個(gè)新的miRNA與狂犬病病毒感染有關(guān)。在此基礎(chǔ)上,本實(shí)驗(yàn)還對(duì)miR-34a-3p、miR-155-5p和miR-223-3p這3個(gè)表達(dá)差異的miRNA進(jìn)行了real-time qRCR驗(yàn)證,結(jié)果表明,兩種方法檢測(cè)呈表達(dá)趨勢(shì)相似的為miR-155-5p和miR-223-3p,均呈上調(diào)趨勢(shì),但miR-34a-3p差異倍數(shù)并不相符,初步推測(cè)該結(jié)果可能與

4、檢測(cè)方法有關(guān)。
　　本研究選取了miR-101c、miR-155和miR-223這3個(gè)差異表達(dá)的miRNA,從miRBasce中獲取目的基因后,擴(kuò)增包含其前體在內(nèi)的miRNA初級(jí)轉(zhuǎn)錄物片段,構(gòu)建了3個(gè)重組質(zhì)粒 pEGFP-C1-miR-101c、pEGFP-C1-miR-155和pEGFP-C1-miR-223,并成功在BHK細(xì)胞上表達(dá)。同時(shí)探索了3個(gè)重組質(zhì)粒與狂犬病病毒的相互作用,希望找出miRNA通過(guò)與病毒的哪些基因作用而發(fā)揮