流感病毒感染與細(xì)胞自噬間相互作用的研究.pdf

1、自噬是真核細(xì)胞內(nèi)降解長半衰期蛋白和胞漿中器官的重要途徑。自噬的調(diào)節(jié)是一個(gè)復(fù)雜的過程，大量的胞內(nèi)外刺激以及病原體的侵入都可以伴隨細(xì)胞自噬的發(fā)生?，F(xiàn)在已證實(shí)自噬在RNA病毒的復(fù)制過程中發(fā)揮重要作用。流感病毒是一種RNA病毒，它的感染可以引起細(xì)胞內(nèi)信號(hào)發(fā)生一系列的變化，但是有關(guān)流感病毒感染和細(xì)胞自噬間的關(guān)系仍未見報(bào)道。本試驗(yàn)通過運(yùn)用對(duì)自噬泡特異性標(biāo)記物GFP-LC3陽性點(diǎn)數(shù)的統(tǒng)計(jì)、自噬泡示蹤劑MIX2染色以及研究自噬最經(jīng)典的方法電鏡技術(shù)來監(jiān)測

2、流感病毒感染后細(xì)胞自噬活性的變化，結(jié)果證實(shí)了A型流感病毒感染可以誘導(dǎo)細(xì)胞自噬活性的增強(qiáng)。為了證實(shí)自噬在流感病毒感染過程中的作用，我們運(yùn)用細(xì)胞自噬的抑制劑3-MA，wortmannin抑制細(xì)胞的自噬后感染流感病毒，結(jié)果發(fā)現(xiàn)流感病毒效價(jià)降低；同時(shí)，為了進(jìn)一步驗(yàn)證這一結(jié)果，我們運(yùn)用自噬泡形成過程中必需的兩個(gè)自噬基因LC3和Beclin 1的siRNA，轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞干擾掉細(xì)胞中內(nèi)源性自噬基因LC3和Beclin 1的表達(dá)，再感染流感病毒，結(jié)

3、果發(fā)現(xiàn)流感病毒的效價(jià)明顯下降。從而證明細(xì)胞中自噬的存在為流感病毒的感染提供了有利的條件。然而，令人感興趣的是當(dāng)我們使用自噬的促進(jìn)劑Raparnycin誘導(dǎo)細(xì)胞的自噬后再感染病毒，我們并沒有發(fā)現(xiàn)病毒效價(jià)的增高，反而是降低。通過使用MDC染色和Lysotraeker-Red染色的方法來監(jiān)測細(xì)胞的自噬活性和溶酶體活性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)當(dāng)用自噬的誘導(dǎo)劑Rapamycin處理細(xì)胞后再感染病毒，在細(xì)胞自噬活性增強(qiáng)的同時(shí)，細(xì)胞的溶酶體活性也顯著增強(qiáng)；而單獨(dú)病