流感病毒感染的中性粒細(xì)胞作為載體介導(dǎo)病毒對(duì)宿主機(jī)體的多器官感染.pdf

1、自2009年H1N1甲型流感病毒的全球大爆發(fā)后，21世紀(jì)的人類已經(jīng)經(jīng)歷了數(shù)次流感病毒的季節(jié)性和區(qū)域性小流行，由于其爆發(fā)迅速而且傳播廣泛的特點(diǎn)，極易導(dǎo)致成千上萬人的感染和死亡。H1N1和H5N1甲型流感病毒是兩株在世界范圍內(nèi)對(duì)人類健康具有極大威脅的新型流感病毒，H1N1流感病毒擁有很高的人傳人傳播率，而高致病性禽流感病毒H5N1則擁有超過60％的高致死率。早先的研究發(fā)現(xiàn)，H1N1流感病毒擁有兩段H5N1流感病毒基因序列片段，是擁有HIN1

2、和H5N1兩種類型特征的流感病毒。值得注意的是這兩種病毒株擁有極高的相似性，尤其是致病性和致死性更高的2009 H1N1與H5N1相比，則擁有更多癥狀上的相似性。
　　我們以前的研究結(jié)果表明H5N1禽流感病毒感染的病人存在多器官感染的現(xiàn)象，包括肺部以外的脾臟、肝臟、淋巴結(jié)、胃腸道、腎臟和腦等器官。從H5N1病人的外周血中可檢測(cè)到病毒血癥及被感染的免疫細(xì)胞，因此病毒極有可能是通過病毒血癥或者被感染的免疫細(xì)胞而導(dǎo)致肺外廣泛播散和多器官

3、感染的結(jié)果。此外，2009 H1N1感染的病人尸檢報(bào)告指出亦存在中性粒細(xì)胞被病毒感染的現(xiàn)象，至此我們猜測(cè)中性粒細(xì)胞很可能作為流感病毒的載體之一介導(dǎo)人體多器官感染。
　　為了證實(shí)這一假設(shè)的正確性我們進(jìn)行了以下三個(gè)方面的工作：1.分離和純化人的外周血中性粒細(xì)胞；2.驗(yàn)證中性粒細(xì)胞是否可以被2009 H1N1流感病毒感染并且激活病毒在細(xì)胞的復(fù)制和釋放；3.細(xì)胞共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證病毒感染的中性粒細(xì)胞是否可介導(dǎo)宿主機(jī)體多器官感染。主要的實(shí)驗(yàn)結(jié)果

4、如下：
　　1.分離和純化人的外周血中性粒細(xì)胞。
　　從健康志愿者的血液樣本中分離純化新鮮的中性粒細(xì)胞。通過免疫熒光法和流式細(xì)胞術(shù)驗(yàn)證分離細(xì)胞的特異性及其純度。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示分離的中性粒細(xì)胞純度高達(dá)99.2%。2.2009 H1N1流感病毒株感染人外周血中性粒細(xì)胞并且激活病毒顆粒在細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制和胞外釋放。
　　將分離出的中性粒細(xì)胞與2009 H1N1流感病毒共同孵育，利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR、免疫蛋白質(zhì)印記和免疫熒光法等實(shí)

5、驗(yàn)技術(shù)，我們證實(shí)了2009 H1N1可以感染人的中性粒細(xì)胞，并可引起中性粒細(xì)胞形態(tài)發(fā)生顯著地變化，包括細(xì)胞膜的完整性損壞、核固縮和核碎裂等。通過 TCID50實(shí)驗(yàn)，我們?cè)诓《靖腥竞蟮闹行粤＜?xì)胞培養(yǎng)上清中檢測(cè)到新釋放出的有活性的成熟病毒顆粒。以上這些結(jié)果顯示2009 H1N1病毒可以感染中性粒細(xì)胞并在其中復(fù)制進(jìn)而釋放出新增殖的、成熟的病毒顆粒。
　　3.細(xì)胞共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證病毒感染的中性粒細(xì)胞可作為載體介導(dǎo)病毒對(duì)宿主的多器官感染。

6、r>　　通過與人的正常細(xì)胞系共培養(yǎng)，我們發(fā)現(xiàn)2009 H1N1流感病毒感染的中性粒細(xì)胞可釋放出新的成熟病毒顆粒感染其它細(xì)胞。利用免疫細(xì)胞化學(xué)法和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)手段，我們發(fā)現(xiàn)新合成的病毒顆粒對(duì)細(xì)胞的感染率更高。
　　綜上所述，本研究的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示2009 H1N1流感病毒不僅可以感染人的中性粒細(xì)胞，而且還可以在細(xì)胞內(nèi)完成復(fù)制并釋放出成熟的病毒顆粒。因此，2009 H1N1流感病毒感染的中性粒細(xì)胞可以視為流感病毒的載體而介導(dǎo)宿主機(jī)體的