外泌體miRNA作為三種性質(zhì)胸腔積液標(biāo)志物的研究.pdf

1、背景：胸腔積液（pleural effusion，PE）是多種原因?qū)е滦啬で怀霈F(xiàn)的過(guò)多液體，常繼發(fā)于肺和胸膜疾病，及時(shí)準(zhǔn)確的胸腔積液性質(zhì)鑒別對(duì)疾病的診療至關(guān)重要。在我國(guó)，原發(fā)性肺癌以及肺結(jié)核是導(dǎo)致胸腔積液的首要原因。近20％的患者在胸腔積液常規(guī)生化、胸部X線、CT甚至細(xì)胞病理學(xué)檢查后，仍然不能明確病因。而作為胸腔積液性質(zhì)鑒別診斷“金標(biāo)準(zhǔn)”的胸腔鏡或胸膜活檢等侵入性操作手段，診斷準(zhǔn)確率高，但創(chuàng)傷大、風(fēng)險(xiǎn)高，患者依從性較差。目前，國(guó)內(nèi)外關(guān)于

2、胸腔積液的性質(zhì)鑒定高水平研究指標(biāo)有白介素、CEA、內(nèi)皮素等可溶性物質(zhì)，但這些可溶性物質(zhì)有來(lái)源多元化、缺乏溯源性、性質(zhì)不穩(wěn)定、檢測(cè)敏感度和特異度有限等諸多不足，即使聯(lián)合應(yīng)用也難有滿意效果。
　　外泌體是活細(xì)胞分泌的納米級(jí)囊性微泡，可以通過(guò)物理阻隔及RNA沉默復(fù)合體（RISC）中的Ago2復(fù)合物相結(jié)合，避免了RNA酶的消化，在一定程度上增強(qiáng)了它所攜帶的 miRNA、mRNA等生物活性分子的穩(wěn)定性。因此，外泌體miRNA作為診斷標(biāo)志物，

3、具備性質(zhì)穩(wěn)定、含量較高、有溯源性以及無(wú)創(chuàng)檢測(cè)等優(yōu)勢(shì)。本研究擬收集不同性質(zhì)胸腔積液的外泌體，篩選其中可作為肺腺癌及肺結(jié)核胸腔積液性質(zhì)鑒別的特征性外泌體 miRNA譜，分析探討此外泌體 miRNA在胸腔積液診斷上的臨床應(yīng)用價(jià)值。
　　目的：篩選胸腔積液性質(zhì)相關(guān)特征性外泌體miRNA譜，為臨床快速、準(zhǔn)確的鑒別胸腔積液提供重要手段。
　　方法：收集三種性質(zhì)的胸腔積液（肺腺癌、肺結(jié)核以及炎性）并提取外泌體；根據(jù)標(biāo)本來(lái)源分組送檢外泌體

4、miRNA，通過(guò)小 RNA深度測(cè)序篩選出組間差異表達(dá) miRNA；接著分析整理差異 miRNA進(jìn)而確定具有臨床鑒別診斷價(jià)值的miRNA譜；最后，運(yùn)用基于SYBR熒光染料的實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)對(duì)篩選出來(lái)的特征性miRNA譜進(jìn)行臨床驗(yàn)證。
　　結(jié)果：（1）成功收集并提取到不同性質(zhì)胸腔積液的外泌體；（2）小RNA深度測(cè)序結(jié)果顯示肺腺癌性、結(jié)核性以及炎性胸腔積液的外泌體miRNA組間比較均存在顯著差異，并且存在特征性 miRNA組合（m

5、iR-483-5p、miR-205-5p、miR-375、miR-200c-3p、miR-429、miR-200b-3p、miR-200a-3p、miR-203a-3p、miR-141-3p、miR-148a-3p、miR-451a、miR-150-5p），可以很好的對(duì)三種性質(zhì)胸腔積液進(jìn)行鑒別診斷；（3）除外 miR-205-5p、miR-148a-3p，其他 miRNA在熒光定量PCR中的表達(dá)趨勢(shì)與小RNA測(cè)序結(jié)果一致。
　　結(jié)