帕金森病患者血漿外泌體的分離鑒定及miRNA表達譜分析.pdf

1、背景：
　　microRNA（miRNA）是一種小的非編碼RNA，通過促進靶mRNA降解或抑制其翻譯起到轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)作用，近年來有研究報道m(xù)iRNA參與帕金森?。≒arkinson'sdisease，PD）的發(fā)生發(fā)展，且某些差異表達的miRNA有助于PD的診斷。
　　目的：
　　對比分析PD患者與對照者血漿外泌體中的miRNA，并進行靶基因預(yù)測及KEGG通路分析，以尋找出有意義的miRNA。
　　方法：
　　

2、1、分別收集13例散發(fā)性PD患者及與其年齡性別相匹配的健康對照者的血漿樣本。
　　2、用Invitrogen試劑盒從血漿中分離外泌體，通過qNano測定濃度及大小分布，Westernblot檢測外泌體標(biāo)記蛋白CD63、Alix的表達以對其進行鑒定。
　　3、使用高通道測序檢測兩組血漿外泌體miRNA的表達差異。
　　4、使用miRNA靶基因預(yù)測軟件對miR-10a-5p、miR-485-5p、miR-15b和miR-1

3、95進行靶基因預(yù)測，并對預(yù)測的靶基因進行KEGG通路分析。
　　結(jié)果：
　　1、從血漿中分離出mode直徑<100nm、表達外泌體標(biāo)記蛋白CD63和Alix的粒子，鑒定為外泌體。
　　2、在表達明顯差異(Ratio>2.0，P<0.05)的miRNA中，與對照組相比，PD組以上調(diào)為主（65.3％）。
　　3、miR-10a-5p、miR-485-5p、miR-15b和miR-195預(yù)測的靶基因均參與神經(jīng)營養(yǎng)因子信