燕窩唾液酸糖蛋白的純化鑒定及體外消化吸收、抗炎活性研究.pdf

1、燕窩具有促進細胞生長、抑制凝血反應、抗流感病毒、提高骨骼強度以及清除自由基等多種營養(yǎng)功效。目前對于燕窩的研究主要集中于整體營養(yǎng)成分分析及真假鑒別等,而對其主要活性成分唾液酸糖蛋白(Sialoglycoprotein,SGP)的研究相對缺乏。因此,本論文以馬來西亞官燕龍牙盞為實驗材料,從SGP的純化鑒定、消化吸收以及抗炎癥活性三大方面展開深入的研究,所得主要結論如下:
　　首先對燕窩水浸提物(EBNE)進行蛋白質含量、總糖含量、唾液

2、酸含量、SDS-PAGE及Lectin blot性質分析,確定EBNE主要由SGP組成,且具有特異凝集素親和能力的α2,3 SGP及α2,6 SGP主要分布于30~60kDa區(qū)域。依次采用Superdex75凝膠層析、QFF強陰離子交換層析以及MAA-Sepharose4B、SNA-Sepharose4B凝集素親和層析,建立了燕窩中43kDaα2,3 SGP、50kDaα2,3 SGP及43kDaα2,6 SGP的分離純化方法,并利用M

3、ALDI TOF-TOF/MS對純化的三種SGP進行肽段序列分析及蛋白鑒定。鑒定結果表明,三者均同源于酸性哺乳動物幾丁質酶及類幾丁質酶蛋白。
　　針對冰糖燕窩燉煮過程中美拉德反應對體外消化影響展開研究,同時利用體外模擬消化結合Caco-2單層細胞跨膜吸收模型分析燕窩糖蛋白腸道吸收方式。結果表明, EBNE在模擬胃液環(huán)境下明顯降解;葡萄糖參與的美拉德反應顯著影響燕窩中α2,3 SGP及α2,6 SGP的凝集素親和能力,且會提高EBN

4、E耐胃蛋白酶消化能力。通過測定200μg/mL DEBNE及DMEBNE對Caco-2單層細胞模型作用180min內(nèi) TEER變化,發(fā)現(xiàn)燕窩糖蛋白通過胞旁轉運途徑進入腸內(nèi)壁側吸收,DMEBNE在5~30min時間內(nèi)吸收效果顯著(P<0.05),60min出現(xiàn)極顯著(P<0.01)的胞旁轉運效果。此外,美拉德反應會促進EBNE腸道胞旁轉運吸收。
　　利用LPS誘導的RAW264.7炎癥細胞模型,探討體外消化、美拉德反應以及不同末端唾

5、液酸連接形式的SGP對LPS誘導RAW264.7細胞產(chǎn)生炎癥反應的影響。MTT細胞增殖實驗結果表明,燕窩糖蛋白可以抑制炎癥細胞增殖,且α2,3 SGP的抑制效果在0.01~150μg/mL濃度范圍內(nèi)高于α2,6 SGP的抑制效果。同時,α2,3 SGP對LPS誘導的RAW264.7炎癥細胞NO生成抑制率高達59.37％(P=0.002),α2,6 SGP產(chǎn)生的NO生成抑制率最高值為54.85%(P=0.005),兩者均具有極顯著(P<0