2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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1、高效液相色譜作為生物大分子分離純化的重要方法,近年來(lái)在蛋白折疊方面也顯示出其獨(dú)特的魅力,并且已經(jīng)發(fā)展成為蛋白折疊液相色譜法,對(duì)很多重組蛋白藥物實(shí)現(xiàn)了成功復(fù)性。蛋白折疊液相色譜法的特點(diǎn)是蛋白折疊是在固定相表面進(jìn)行的,因此固定相的性質(zhì)對(duì)蛋白的折疊起到了很大作用。本實(shí)驗(yàn)室近期合成的具有離子交換和疏水兩種機(jī)理的二維色譜填料,僅用一根色譜柱,就可以實(shí)現(xiàn)HIC-IEC或IEC-HIC的二維色譜分離效果,這種新型色譜填料已經(jīng)在蛋白分離上取得了很好的效

2、果。本論文以還原變性的核糖核酸酶A為模型蛋白,對(duì)這種雙功能色譜固定相在蛋白復(fù)性方面應(yīng)用的可行性和優(yōu)越性進(jìn)行了探討。此外,應(yīng)用三種多維色譜-質(zhì)譜聯(lián)用模式對(duì)新生兒臍帶血血清中活性成分進(jìn)行了初步篩選。本論文共四章
   第一章:文獻(xiàn)綜述概括介紹了蛋白折疊液相色譜法的發(fā)展、進(jìn)展及應(yīng)用,本論文的研究策略和意義,以及多維色譜在蛋白質(zhì)組學(xué)中的應(yīng)用。
   第二章:采用雙能功色譜固定相,在離子交換色譜(IEC)模式下,詳細(xì)考察了流動(dòng)相中

3、脲濃度、pH、流速、蛋白濃度、還原型谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽(GSH/GSSG)對(duì)還原變性核糖核酸酶A的折疊影響。發(fā)現(xiàn)在復(fù)性流動(dòng)相中加入低濃度的脲能夠有效抑制還原變性RNase A的聚集沉淀,而GSH/GSSG的加入能夠加速二硫鍵的對(duì)接反應(yīng),并且在較高的流速下復(fù)性可以取得更好的結(jié)果,在對(duì)各因素進(jìn)行條件優(yōu)化后,得到一個(gè)最佳條件,在該條件下,還原變性RNase A的質(zhì)量回收率為85.5%,活性回收率為75.0%。在IEC模式下,蛋白的質(zhì)量回

4、收率較高,并且可在高變性蛋白濃度下進(jìn)行復(fù)性。
   第三章:采用雙功能色譜固定相,在疏水色譜(HIC)模式下,詳細(xì)討論了流動(dòng)相中添加不同濃度的脲、不同比例的GSH/GSSG、流動(dòng)相pH和變性蛋白濃度對(duì)還原變性RNaseA折疊效率的影響。結(jié)果表明,流動(dòng)相中添加2.0 mol/L的脲,不僅可以有效抑制變性蛋白的聚集沉淀,還可提高其復(fù)性效率和質(zhì)量回收率。弱堿性的流動(dòng)相和一定比例的GSH/GSSG有利于還原變性RNase A二硫鍵的正確

5、對(duì)接。在最優(yōu)化復(fù)性條件下,HIC對(duì)還原變性RNase A能完全復(fù)性,還原脲變RNase A的活性回收率和質(zhì)量回收率分別為98.0%和61.9%,而還原胍變分別為100.1%和66.8%。在疏水模式下,蛋白的活性回收率較高。
   第四章:使用多維色譜(mDLC)結(jié)合基質(zhì)輔助激光解吸附飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI-TOF-MS)對(duì)新生兒臍帶血血清中抗腫瘤活性成分進(jìn)行了篩選和制備。首先用分析型的SEC對(duì)臍帶血進(jìn)行了預(yù)分離,活性檢測(cè)后,對(duì)

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