EB病毒對(duì)臍帶血樹(shù)突狀細(xì)胞分化和功能的影響.pdf

1、目的：通過(guò)建立EB病毒（Epstein-Barr Virus，EBV）感染單核細(xì)胞和樹(shù)突狀細(xì)胞（dendritic cell，DC）的培養(yǎng)體系，研究臍帶血單核細(xì)胞和DC的EBV相關(guān)蛋白的表達(dá)，探討EBV對(duì)臍帶血DC吞噬功能、表面分化和成熟標(biāo)記表達(dá)以及細(xì)胞因子分泌功能的影響，并且與相同培養(yǎng)條件下成人外周血單核細(xì)胞和DC比較，研究?jī)烧咴诓《鞠嚓P(guān)蛋白表達(dá)及細(xì)胞分化和功能變化方面的差異性。以期從抗原提呈細(xì)胞這一免疫應(yīng)答的起始環(huán)節(jié)，來(lái)闡明EBV逃

2、逸宿主免疫監(jiān)視的可能機(jī)制，為臨床防治EBV感染提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：采用RT-熒光定量PCR方法檢測(cè)病毒相關(guān)蛋白基因在單核細(xì)胞和DC上的差異性表達(dá)。采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表面病毒相關(guān)蛋白的表達(dá)、DC吞噬葡聚糖的能力、以及細(xì)胞表面分化和成熟標(biāo)記表達(dá)的陽(yáng)性率和相對(duì)熒光強(qiáng)度。采用ELISA方法和RT-熒光定量PCR方法分別檢測(cè)DC分泌細(xì)胞因子的水平和細(xì)胞因子mRNA的表達(dá)。 結(jié)果：在感染EBV的臍帶血單核細(xì)胞表面檢測(cè)到了

3、病毒相關(guān)蛋白早期抗原（early antigen，EA）和衣殼抗原（virus capsid antigen，VCA）的表達(dá)。RT-熒光定量PCR檢測(cè)到病毒相關(guān)蛋白潛伏膜蛋白1（Latent membrane protein 1，LMP1）和BcLF-1的mRNA表達(dá)，并且成人外周血單核細(xì)胞和DC內(nèi)LMP1蛋白基因模板的拷貝數(shù)明顯高于臍帶血單核細(xì)胞和DC。感染EBV后，臍帶血DC吞噬葡聚糖的能力降低；細(xì)胞表面分化和成熟標(biāo)記與正常對(duì)照相比

4、表現(xiàn)為：CD14分子的下調(diào)不明顯，而MHC Ⅱ類分子和協(xié)同刺激分子上調(diào)不明顯，MHCⅠ類分子的表達(dá)降低；細(xì)胞因子分泌的改變表現(xiàn)為：LPS刺激后細(xì)胞分泌的IL-6、IL-10和TNF-α不增高，而TGF-β1在EBV感染后分泌增高，同時(shí)EBV還抑制了IL-12p35和IFN-γ的mRNA表達(dá)。 結(jié)論：?jiǎn)魏思?xì)胞和未成熟DC均可被EBV感染，并且由于成人外周血單核細(xì)胞和DC內(nèi)LMP1蛋白mRNA的拷貝數(shù)明顯高于臍帶血單核細(xì)胞和DC，推