內(nèi)源性神經(jīng)酰胺對(duì)IL-6基因表達(dá)的影響及其相關(guān)機(jī)制的研究.pdf

1、目的：
　　研究?jī)?nèi)源性神經(jīng)酰胺對(duì)于THP-1細(xì)胞各種炎癥因子基因表達(dá)的影響，尤其是對(duì)白細(xì)胞介素(IL)-6的影響及其相關(guān)機(jī)制;研究?jī)?nèi)源性神經(jīng)酰胺對(duì)于倉(cāng)鼠肝臟組織炎癥影響，及其與脂代謝和相關(guān)microRNA的相關(guān)機(jī)制。進(jìn)一步明確神經(jīng)酰胺與炎癥、脂代謝的關(guān)系，及其意義。
　　方法：
　　1、THP-1細(xì)胞的體外培養(yǎng)，分為對(duì)照組、Myriocin抑制神經(jīng)酰胺合成組、Palmitate促進(jìn)神經(jīng)酰胺合成組、PA+M組。Myrio

2、cin終濃度為50μmol/L，Palmitate終濃度為500μmol/L。Myriocin干預(yù)2h，再加入Palmitate培養(yǎng)16h。利用LC-MS法檢測(cè)各組不同類型的神經(jīng)酰胺的含量。
　　2、利用Real-time PCR法檢測(cè)各組細(xì)胞及兩組倉(cāng)鼠的IL-6、IL-1β、IL-18、TNF-α的mRNA的表達(dá)水平，及兩組倉(cāng)鼠的miR-486的表達(dá)水平
　　3、用ELISA法檢測(cè)各組THP-1細(xì)胞上清中IL-6的釋放量。

3、
　　4、利用Westernblot法檢測(cè)各組細(xì)胞質(zhì)IκBα與細(xì)胞核NF-κBP65蛋白的表達(dá)水平。
　　5、利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組細(xì)胞ROS的水平。
　　6、利用海馬生物能量代謝測(cè)定儀XF96檢測(cè)各組細(xì)胞的基礎(chǔ)代謝率、ATP產(chǎn)量、最大呼吸能力、儲(chǔ)備呼吸能力。
　　7、各組細(xì)胞DNA的IL-6甲基化的檢測(cè)。
　　8、利用高果糖飲食制造倉(cāng)鼠模型，LC-MS法檢測(cè)兩組組不同類型的神經(jīng)酰胺的含量。
　　9、

4、用ELISA法檢測(cè)兩組倉(cāng)鼠血清中VLDL、HDL、LDL的含量。
　　結(jié)果：
　　1、PA組各種類型的神經(jīng)酰胺均有所升高，PA+M組又較PA組有所下降。
　　2、內(nèi)源性神經(jīng)酰胺促進(jìn)THP-1細(xì)胞合成釋放IL-6，但卻沒有促進(jìn)TNF-α、IL-1β、IL-18的表達(dá)。
　　3、內(nèi)源性神經(jīng)酰胺增加IκBα的降解及核內(nèi)NF-κBP65水平。
　　4、神經(jīng)酰胺能降低細(xì)胞的ATP產(chǎn)生、最大呼吸能力、儲(chǔ)備呼吸能力。

5、r>　　5、四組細(xì)胞IL-6基因甲基化情況沒有差異。
　　6、HFD組倉(cāng)鼠較對(duì)照組倉(cāng)鼠各種類型的神經(jīng)酰胺均有所升高。
　　7、HFD組倉(cāng)鼠較對(duì)照組倉(cāng)鼠miR-486表達(dá)量下降。
　　8、HFD組倉(cāng)鼠較對(duì)照組倉(cāng)鼠IL-6 mRNA的表達(dá)量升高。
　　9、HFD組倉(cāng)鼠較對(duì)照組倉(cāng)鼠血清中VLDL、HDL、LDL含量升高。
　　結(jié)論：
　　本實(shí)驗(yàn)證明內(nèi)源性神經(jīng)酰胺可以特異性促進(jìn)THP-1細(xì)胞IL-6的基因表達(dá)