疏肝健脾法對潰瘍性結(jié)腸炎大鼠結(jié)腸組織IL-6、IL-6R表達(dá)的影響及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：本課題以TNBS/乙醇溶液灌腸+束縛應(yīng)激+飲食失節(jié)大鼠肝郁脾虛型UC為切入點(diǎn)，基于中醫(yī)“整體觀”與“形神一體”理論，觀察痛瀉要方對UC模型大鼠結(jié)腸組織中細(xì)胞因子IL-6、IL-6R蛋白的影響，并與前期研究結(jié)果相佐證，闡釋痛瀉要方通過調(diào)控大腦中IL-6/IL-6R的信號通路，進(jìn)而降低IL-6、IL-6R蛋白在局部腸粘膜的表達(dá)，達(dá)到治療UC的目的，這可能是痛瀉要方治療UC模型大鼠的生物學(xué)機(jī)制之一，為臨床上應(yīng)用該方治療潰瘍性結(jié)腸炎提供實(shí)

2、驗(yàn)室依據(jù)。
　　方法：將SPF級Wistar大鼠進(jìn)行為期一周的適應(yīng)性喂養(yǎng)，適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后，隨機(jī)挑選15只作為空白組，其余大鼠進(jìn)行不定時(shí)束縛（6h?d-1）并隔日給食，持續(xù)一周后禁食48h，然后采用2、4、6-三硝基苯磺酸（TNBS）/乙醇溶液（100mg·kg-1TNBS+50％乙醇溶液0.25mL）復(fù)制UC的模型，模型成功后，再隨機(jī)分為模型組、美沙拉嗪組、痛瀉要方低、中、高劑量組，空白組給予等體積生理鹽水灌腸。空白組大鼠正常飼

3、養(yǎng)，其余各組大鼠繼續(xù)進(jìn)行不定時(shí)束縛（6h?d-1）并隔日給食，2周后模型成功。開始給藥：造模后第1天各組大鼠按照10mL?kg-1的體積進(jìn)行灌胃，其中痛瀉要方低、中、高劑量組分別給予生藥2.75，5.5，11g?kg-1?d-1劑量灌胃，美沙拉嗪組給予0.5g?kg-1?d-1劑量灌胃，空白組、模型組給予0.9%生理鹽水進(jìn)行灌胃，1次?d-1，連續(xù)21天后處死，取大鼠病變結(jié)腸組織，肉眼觀察記錄大鼠結(jié)腸形態(tài)及結(jié)腸損傷情況，并分別選用免疫組

4、化、蛋白質(zhì)印跡和激光共聚焦法檢測各組大鼠結(jié)腸組織中的IL-6和IL-6R的蛋白定位、半定量及共表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.SP法檢測結(jié)果與空白組比較，模型組大鼠結(jié)腸組織中IL-6、IL-6R平均光密度（OD）值均顯著升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與模型組比較，其余各治療組大鼠結(jié)腸組織中IL-6、IL-6R平均光密度（OD）值明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　2.Western Blot法檢

5、測結(jié)果與空白組相比，模型組大鼠結(jié)腸組織中IL-6、IL-6R蛋白表達(dá)明顯升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與模型組相比，其余各治療組大鼠結(jié)腸組織中IL-6、IL-6R蛋白表達(dá)明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　3.激光共聚焦免疫雙標(biāo)法檢測結(jié)果與空白組相比，模型組大鼠結(jié)腸組織中IL-6、IL-6R蛋白表達(dá)顯著升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；與模型組相比，美沙拉嗪組和痛瀉要方中、高劑量組大鼠結(jié)腸組織中

6、IL-6、IL-6R蛋白表達(dá)明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）,低劑量組降低不明顯(P＞0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.潰瘍性結(jié)腸炎大鼠結(jié)腸組織中炎癥因子IL-6、IL-6R較高，說明潰瘍性結(jié)腸大鼠的腸粘膜呈炎癥反應(yīng)的病理狀態(tài)，而痛瀉要方能降低UC模型大鼠結(jié)腸組織中炎癥因子IL-6、IL-6R蛋白的表達(dá)含量，說明痛瀉要方具有抑制炎癥反應(yīng)，恢復(fù)免疫穩(wěn)態(tài)，治療UC的作用。
　　2.較高劑量的痛瀉要方降低潰瘍性結(jié)