炭樣小單孢菌JXNU-1中核苷類抗生素生物合成相關(guān)蛋白的篩選.pdf

1、實(shí)驗(yàn)室在前期研究中篩選到一株具有廣譜抗菌活性的炭樣小單孢菌JXNU-1，其發(fā)酵所產(chǎn)核苷類抗生素對(duì)常見(jiàn)的 G+和 G-細(xì)菌均有抑制作用，但該抗生素的生物合成與分子調(diào)控機(jī)制尚不清楚。為探尋炭樣小單孢菌JXNU-1中抗生素的生物合成與分子調(diào)控機(jī)制，本文采用相對(duì)和絕對(duì)定量同位素標(biāo)記（isobaric tags for relative and absolute quantitation，iTRAQ）技術(shù)對(duì)炭樣小單孢菌 JXNU-1分泌抗生素前后

2、期的蛋白質(zhì)組進(jìn)行分析，主要結(jié)論如下：
　?。?）共鑒定出炭樣小單孢菌菌體蛋白2390個(gè)，獲得172個(gè)差異表達(dá)蛋白，產(chǎn)物合成期上調(diào)表達(dá)蛋白76個(gè)，下調(diào)表達(dá)蛋白96個(gè)；
　　（2）根據(jù)蛋白質(zhì)組學(xué)分析，上調(diào)蛋白中含有12個(gè)與抗生素合成密切相關(guān)蛋白，分別是ABC轉(zhuǎn)運(yùn)器底物結(jié)合蛋白、ABC轉(zhuǎn)運(yùn)器 ATP結(jié)合蛋白、糖基轉(zhuǎn)移酶、P450單加氧酶、S-腺苷甲硫氨酸依賴的甲基轉(zhuǎn)移酶、甲基轉(zhuǎn)移酶和絲氨酸羥甲基轉(zhuǎn)移酶。利用實(shí)時(shí)熒光定量 PCR（r

3、eal-time quantitative reverse transcription PCR,qRT-PCR）技術(shù)對(duì)篩選出的相關(guān)蛋白的mRNA定量分析，結(jié)果表明這12個(gè)基因均為表達(dá)上調(diào)基因，與蛋白的表達(dá)趨勢(shì)相符；
　?。?）采用生物信息學(xué)方法對(duì)上述12個(gè)抗生素合成相關(guān)蛋白進(jìn)行基因定位，結(jié)果表明相關(guān)蛋白分布在5個(gè)抗生素合成相關(guān)基因簇中，且Cluster2被推測(cè)為炭樣小單孢菌 JXNU-1生物合成抗生素的基因簇。
　　上述研究