水稻白葉枯病菌FtsZ的體外表達(dá)及炭樣小單孢菌JXNU-1抗生素對其作用研究.pdf

1、炭樣小單孢菌菌株JXNU-1是一株從土壤中分離得到的放線菌，所產(chǎn)單一組分的廣譜抗生素對常見的G+和G—均有抑制作用，但其抗菌機(jī)制尚不明確。本研究以引起水稻生產(chǎn)嚴(yán)重病害的水稻白葉枯病菌為例，研究了炭樣小單孢菌JXNU-1抗生素對水稻白葉枯病菌FtsZ蛋白的作用，具體內(nèi)容和結(jié)果如下：
　　(1)以水稻白葉枯病菌總DNA為模板，采用巢式PCR方法擴(kuò)增獲得水稻白葉枯病菌FtsZ基因，構(gòu)建FtsZ基因的表達(dá)載體pET-22b-/tsZ，轉(zhuǎn)化

2、表達(dá)宿主E.coli BL21后，經(jīng)PCR、NdeI/Xho I雙酶切及測序鑒定、陽性克隆子經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)，F(xiàn)tsZ蛋白經(jīng)鎳柱純化后，通過SDS-PAGE和 Western-blotting分析鑒定，獲得了電泳純的FtsZ蛋白；
　　(2)以單因素實(shí)驗(yàn)法優(yōu)化了重組大腸桿菌表達(dá)FtsZ蛋白的條件，即在誘導(dǎo)的菌體濃度（以O(shè)D6。。表示）為0.8，IPTG濃度為1.0mmol/L，溫度為37℃，誘導(dǎo)時間為3 h，F(xiàn)tsZ蛋白有最大可

3、溶性表達(dá)；
　　(3)利用生物信息學(xué)方法分析了水稻白葉枯病菌FtsZ蛋白的結(jié)構(gòu)，結(jié)果表明，水稻白葉枯病菌FtsZ為結(jié)構(gòu)穩(wěn)定的親水性蛋白，含414個氨基酸殘基，C端起第15至第187個氨基酸殘基決定其GTPase活性，蛋白含細(xì)菌FtsZ蛋白共有的GTP結(jié)合位點(diǎn)GGGTGTG，F(xiàn)tsZ蛋白二級結(jié)構(gòu)中，螺旋結(jié)構(gòu)為30.4％，折疊結(jié)構(gòu)為11.8%。
　　(4)采用酶學(xué)方法研究了FtsZ蛋白的GTPase特性，結(jié)果表明其最適溫度為50