體外血腦屏障建立及抗生素體外血腦屏障透過研究.pdf

1、目的:
　　通過人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)和小鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞(C6)共培養(yǎng)構(gòu)建體外血腦屏障（Blood-Brain Barrier，BBB）細(xì)胞模型，選擇體外抗菌活性較強(qiáng)而血腦屏障通透性尚不明確的新型抗生素（利奈唑胺，比阿培南，舒巴坦，替加環(huán)素）與治療顱內(nèi)感染的傳統(tǒng)抗生素（萬(wàn)古霉素，美羅培南）進(jìn)行藥物體外血腦屏障透過實(shí)驗(yàn)比較其通透性，篩選合適的新型抗生素或組合為臨床治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染提供理論依據(jù)。
　　方法:
　　

2、1、用人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)和小鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞(C6)通過非接觸式共培養(yǎng)構(gòu)建體外血腦屏障(Blood-Brain Barrier，BBB)細(xì)胞模型，通過測(cè)定跨內(nèi)皮阻抗(TEER)來(lái)評(píng)價(jià)血腦屏障(BBB)的功能。
　　2、選擇體外抗菌活性較強(qiáng)而血腦屏障通透性尚不明確的新型抗生素（利奈唑胺，比阿培南，舒巴坦，替加環(huán)素）與治療顱內(nèi)感染的傳統(tǒng)抗生素（萬(wàn)古霉素，美羅培南）經(jīng)過相應(yīng)處理后配置成0.05、0.1、0.2、0.4、0.6mg

3、/ml系列濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液。取上述系列濃度藥物各20ul，加入空白培養(yǎng)液中分別配置成0.005、0.01、0.02、0.04、0.06mg/ml系列濃度藥物，培養(yǎng)液經(jīng)過預(yù)處理后，采用高效液相色譜檢測(cè)，以藥物峰面積(X)對(duì)其濃度(Y)做線性回歸，求得回歸方程和相關(guān)系數(shù)(R2)。向體外血腦屏障(BBB)細(xì)胞模型供體池內(nèi)分別按0.05mg/ml加入上述六種藥物各1ml，于培養(yǎng)30min、1、2、4h后分別取一部分受體池培養(yǎng)液，培養(yǎng)液經(jīng)過預(yù)處理后，

4、采用高效液相色譜檢測(cè)測(cè)定實(shí)際培養(yǎng)液中藥物濃度，將4h后實(shí)際培養(yǎng)液中藥物濃度與初始藥物濃度比較測(cè)定六種抗生素體外血腦屏障(BBB)模型透過率。
　　結(jié)果:
　　1、通過對(duì)體外血腦屏障細(xì)胞模型跨內(nèi)皮阻抗(TEER)測(cè)定證明HUVEC和C6共培養(yǎng)可成功構(gòu)建體外血腦屏障(BBB)模型，滿足后續(xù)試驗(yàn)需要。
　　2、六種抗生素在0.005-0.6mg/ml范圍內(nèi)線性良好，滿足實(shí)驗(yàn)要求。在相同實(shí)驗(yàn)條件下萬(wàn)古霉素在30min，1h，2

5、h，4h實(shí)際培養(yǎng)液中濃度為0.0015mg/ml，0.0026mg/ml，0.0039mg/ml，0.0048mg/ml，4h后體外BBB透過率為9.6％。利奈唑胺在30min，1h，2h，4h實(shí)際培養(yǎng)液中濃度為0.003mg/ml，0.0047mg/ml，0.0075mg/ml，0.0104mg/ml，4h后透過率為20.8％。比阿培南在30min，1h，2h，4h實(shí)際培養(yǎng)液中濃度為0.0012mg/ml，0.0021 mg/ml，0

6、.0028mg/ml，0.0037mg/ml，4h后透過率為7.4％。美羅培南在30min，1h，2h，4h實(shí)際培養(yǎng)液中濃度為0.0014mg/ml，0.002mg/ml，0.0037mg/ml，0.0052mg/ml，4h后透過率為10.4％。舒巴坦在30min，1h，2h，4h實(shí)際培養(yǎng)液中濃度為0.0015mg/ml，0.0027mg/ml，0.0044mg/ml，0.0051 mg/ml，4h后透過率為10.2％。替加環(huán)素在30m

7、in，1h，2h，4h實(shí)際培養(yǎng)液中濃度為0.0043mg/ml，0.0047mg/ml，0.0056mg/ml，0.0062mg/ml，4h后透過率為12.4％。
　　結(jié)論:
　　1、HUVEC和C6共培養(yǎng)可成功建立在體外能夠反映血腦屏障的細(xì)胞模型。
　　2、利奈唑胺體外血腦屏障透過率較萬(wàn)古霉素明顯升高，可作為革蘭陽(yáng)性菌所致顱內(nèi)感染的首選。美羅培南、替加環(huán)素和舒巴坦體外血腦屏障透過率接近，超劑量替加環(huán)素可作為治療多重耐