2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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1、Brevianamides是一類由絲狀真菌青霉(Penicillium)或曲霉(Aspergillus)產(chǎn)生的異戊二烯基化吲哚類生物堿(prenylated indole alkaloids),該家族成員Brevianamide A與Brevianamide D對草地夜蛾(Spodoptera frugiperda)與煙芽夜蛾(Heliothis virescens)等鱗翅目昆蟲的幼蟲具有顯著的抗蟲活性。
  對絲狀真菌短密青霉(

2、Penicillium brevicompactum NRRL864)的全基因組進行分析,利用生物信息學方法,以Aspergillus versicolor產(chǎn)生的notoamide A的生物合成基因簇為探針,在短密青霉NRRL864基因組中挖掘出4個與真菌生物堿Brevianamide A生物合成相關的基因,并分析了其功能。以短密青霉NRRL864的cDNA為模板,利用PCR技術克隆得到了除BvnA外的其余3個基因,并將這3個基因分別克

3、隆至pET28b表達載體中。將3種構建好的表達載體分別轉入E.coli BL21(DE3)中,獲得了表達菌株,經(jīng)異丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)分別進行誘導表達,表達菌株大量累積相關基因的編碼蛋白。經(jīng)Ni2+-NTA樹脂親和層析,獲得了BvnB和BvnC編碼的重組可溶性蛋白,而BvnD編碼的重組蛋白則以包涵體的形式存在,在進行了帶有助溶性標簽的重組蛋白表達和凍融變復性法嘗試后,仍未能獲得可溶性蛋白。
  對重組BvnC蛋白催

4、化反應的底物特異性、產(chǎn)物結構以及酶促反應的動力學進行了分析。結果表明,在供試的十種化合物中,重組 BvnC僅能催化以Brevianamide F為底物的轉化反應。MS、NMR分析顯示,以二甲基丙烯基二磷酸(Dimethylallyl pyrophosphate)為供體,重組BvnC蛋白能特異性催化異戊烯基轉移至Brevianamide F的α位C上,生成Deoxybrevianamide E,驗證了之前的推測。重組BvnC蛋白催化Bre

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