牛肌肉衛(wèi)星細(xì)胞中抑制MSTN表達(dá)后對(duì)脂肪代謝相關(guān)基因的影響.pdf

1、肌肉生長(zhǎng)抑制素(myostatin，MSTN)屬于轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β(transforming growth factorβ，TGF-β)超家族成員，在骨骼肌中高表達(dá)。眾多研究表明，敲除MSTN后，肌肉質(zhì)量顯著增大，脂肪含量變少。但抑制MSTN表達(dá)后，如何影響脂肪沉積的過(guò)程，尚未研究清楚。
　　本研究利用反義RNA技術(shù)，成功構(gòu)建了雙向表達(dá)載體pMSTN-CMV-CAG-antiMSTN，并通過(guò)Western blot篩選出抑制效果最佳

2、的MSTN的反義載體。將最佳a(bǔ)ntiMSTN載體，RNAi926干擾載體，過(guò)表達(dá)MSTN載體分別轉(zhuǎn)染牛肌肉衛(wèi)星細(xì)胞48h后，Real-timePCR檢測(cè)10種脂肪酸相關(guān)基因相對(duì)表達(dá)量。結(jié)果顯示，抑制MSTN表達(dá)后，脂肪合成相關(guān)基因:FASN(2.29，p＜0.05)、ACC(2.19，p＜0.01)、SCD-1(1.29，p＜0.05)的表達(dá)量均上調(diào);脂肪酸氧化相關(guān)基因:CPTI-B(4.68，p＜0.01)、ACOX-1(1.66，p

3、＜0.01)的表達(dá)量上調(diào)，ECHDC1(0.83，p＜0.05)的表達(dá)量下調(diào);脂肪分解相關(guān)基因:PPARg(2.26，p＜0.01)、LIPE(2.05，p＜0.01)的表達(dá)量上調(diào)，LPL(0.79，p＜0.01)的表達(dá)量下調(diào);脂肪轉(zhuǎn)運(yùn)基因:FATP(1.04，p＞0.05)表達(dá)量不變，無(wú)顯著性差異。總體來(lái)說(shuō)，脂肪氧化和分解的變化(12.27)大于脂肪合成(5.77)。在牛肌肉衛(wèi)星細(xì)胞和轉(zhuǎn)基因小鼠個(gè)體中，利用RNA干擾技術(shù)抑制MSTN表

4、達(dá)后，脂肪合成和降解相關(guān)基因表達(dá)結(jié)果與此有一致的表達(dá)趨勢(shì)。在牛肌肉衛(wèi)星細(xì)胞中，過(guò)表達(dá)MSTN，脂肪合成相關(guān)基因表達(dá)也有提升，但脂肪氧化和分解也大于脂肪合成，只是低于抑制結(jié)果的變化幅度。上述結(jié)果提示：⑴在牛肌肉衛(wèi)星細(xì)胞中，利用反義RNA(M3)抑制MSTN表達(dá)，可以得到與RNA干擾技術(shù)同樣的抑制靶基因表達(dá)的效果。⑵在牛肌肉衛(wèi)星細(xì)胞和轉(zhuǎn)基因鼠中MSTN敲減或過(guò)表達(dá)后脂肪相關(guān)基因的表達(dá)均顯示從脂肪合成與脂肪分解的平衡向脂肪分解方向移動(dòng)。⑶抑制