飼料糖對(duì)大菱鲆脂肪代謝和Ghrelin基因表達(dá)的影響.pdf

1、本論文以我國(guó)重要海水養(yǎng)殖魚(yú)類大菱鲆（Scophthalmus maximus L.）為實(shí)驗(yàn)對(duì)象。研究了飼料中不同聚合度的糖源、糖替代脂肪以及糖替代蛋白對(duì)大菱鲆脂肪代謝和糖脂代謝相關(guān)基因Ghrelin表達(dá)量的影響。本文的研究?jī)?nèi)容和主要研究結(jié)果如下：
　　1、大菱鲆Ghrelin基因的全長(zhǎng)克隆和序列分析
　　以大菱鲆幼魚(yú)為實(shí)驗(yàn)材料，利用同源克隆技術(shù)、3'RACE技術(shù)和5'RACE技術(shù)，從大菱鲆胃部組織中成功擴(kuò)增出Ghrelin基

2、因的全長(zhǎng)序列。大菱鲆Ghrelin基因cDNA全長(zhǎng)序列包括948個(gè)核苷酸，其中包括一個(gè)由321個(gè)核苷酸組成的開(kāi)放閱讀框。大菱鲆Ghrelin成熟肽包含22個(gè)氨基酸，分子量為2342.64u，理論等電點(diǎn)為12.02。在成熟Ghrelin的N末端，有一個(gè)非常保守的位點(diǎn)“GSSFLSP”，可能是Ghrelin的活性中心。BLAST分析顯示，大菱鲆Ghrelin氨基酸序列與已知其他魚(yú)類的Ghrelin氨基酸序列有很高的同源性。系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析顯示

3、，大菱鲆和大黃魚(yú)組成一群，相似性最大，親緣關(guān)系較近，Ghrelin蛋白將脊椎動(dòng)物分成水生脊椎動(dòng)物和陸生脊椎動(dòng)物兩大分支。
　　2、不同聚合度的糖源對(duì)大菱鲆脂肪代謝和Ghrelin基因表達(dá)的影響
　　以初始體質(zhì)量為（8.77±0.16）g的大菱鲆幼魚(yú)為研究對(duì)象，比較分析飼料中添加3種不同聚合度的糖源（葡萄糖、蔗糖和糊精）對(duì)大菱鲆脂肪代謝相關(guān)酶活性、肌肉脂肪酸組成和Ghrelin基因表達(dá)量的影響。結(jié)果表明，不同聚合度的糖源顯著影

4、響了肝臟中與脂肪合成相關(guān)的葡萄糖-6-磷酸脫氫酶和蘋果酸酶的活性（P<0.05）。飼料糖源為葡萄糖時(shí)，大菱鲆肝臟中葡萄糖-6-磷酸脫氫酶和蘋果酸酶的活性顯著（P<0.05）高于其他處理組，而蔗糖和糊精處理組之間沒(méi)有顯著（P>0.05）差異。對(duì)脂肪分解代謝相關(guān)酶活性的分析表明，腸道脂肪酶的活性受飼料中不同糖源的顯著影響（P<0.05）；肝臟脂蛋白脂酶的活性在糖源為葡萄糖時(shí)顯著低于其他處理組（P<0.05）；不同糖源對(duì)肝脂酶的活性沒(méi)有顯著影

5、響（P>0.05）；糊精組的總脂酶活性顯著高于葡萄糖組（P<0.05）。葡萄糖組大菱鲆肌肉中的C16:0和C18:0的含量顯著高于糊精組，而C16:1和C18:1的含量顯著低于糊精組（P<0.05）?？偟膩?lái)說(shuō)，飼料中不同聚合度的糖源對(duì)大菱鲆肌肉脂肪酸含量的影響主要集中在飽和脂肪酸和單不飽和脂肪酸上，而對(duì)多不飽和脂肪酸的影響有限。隨著糖源聚合度的增加，大菱鲆胃部Ghrelin基因的表達(dá)量呈下降趨勢(shì)，葡萄糖組顯著高于（P<0.05）其他處理

6、組。
　　3、糖替代脂肪對(duì)大菱鲆脂肪代謝和Ghrelin基因表達(dá)的影響
　　本實(shí)驗(yàn)旨在研究飼料中糖替代脂肪對(duì)大菱鲆脂肪代謝和Ghrelin基因表達(dá)的影響。以白魚(yú)粉、酪蛋白和明膠為主要蛋白源，以魚(yú)油和大豆卵磷脂為主要脂肪源，分別添加（0％，5%，15%，28%）的糊精，配制成4種糊精替代魚(yú)油（11%，9%，5%，0%）的半精制實(shí)驗(yàn)飼料。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：隨著糖添加比例的升高，葡萄糖-6-磷酸脫氫酶和蘋果酸酶的活性呈先升高后降低的趨

7、勢(shì)，在糖添加比例為15%時(shí)，葡萄糖-6-磷酸脫氫酶的活性最高為（34.66±0.67）nmol/min/mg Prot，顯著高于（P<0.05）糖添加為0%和5%的處理組，蘋果酸酶的活性在不同處理組間沒(méi)有顯著（P>0.05）差異。腸道脂肪酶的活性隨糖添加比例的增加呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì)，在5%糖添加時(shí)脂肪酶的活性最高為（21.11±0.36）U/g Prot，顯著（P<0.05）高于其他處理組；脂蛋白脂酶的活性不受糖替代脂肪的顯著（P>

8、0.05）影響，但是脂蛋白脂酶的活性隨糖添加比例的增加呈下降趨勢(shì)；肝脂酶和總脂酶的活性隨糖添加比例的增加而降低，糖添加為28%的處理組顯著（P<0.05）低于0%的處理組；大菱鲆胃部Ghrelin基因表達(dá)量受糖替代脂肪的顯著（P<0.05）影響，在15%糖添加組，Ghrelin表達(dá)量比5%和28%糖添加組顯著（P<0.05）升高，但是比0%添加組顯著（P<0.05）降低。
　　4、糖替代蛋白對(duì)大菱鲆脂肪代謝的影響
　　在飼料

9、中添加不同水平的糊精（0%，5%，15%），分別替代不同水平（50%，45%，40%）的蛋白質(zhì)以研究糖替代蛋白對(duì)大菱鲆肝臟中脂肪合成相關(guān)酶活性、脂肪分解相關(guān)酶活性以及肝臟中脂肪酸組成的影響。結(jié)果顯示：隨著糖添加比例的增加，葡萄糖-6-磷酸脫氫酶的活性顯著（P<0.05）升高，蘋果酸酶的活性也隨糖添加比例的增加而升高，在糖添加為15%的處理組達(dá)到最高，但0%和5%糖添加處理組間差異不顯著（P>0.05）。隨著糖添加比例的升高，腸道脂肪酶的