飼料中非蛋白能量源對草魚脂肪蓄積及脂肪代謝的影響研究.pdf

1、草魚(Ctenopharyngodonidellus)是世界上產(chǎn)量第二大的魚類，是我國主要的淡水養(yǎng)殖魚類。草魚是一種典型的草食性魚類，在天然水域攝食水草，但在人工養(yǎng)殖中攝食配合飼料。然而，在養(yǎng)殖中由于營養(yǎng)不平衡，如長期投喂低蛋白高能量的人工飼料，結(jié)果導(dǎo)致草魚體內(nèi)脂肪大量蓄積的現(xiàn)象非常普遍，嚴(yán)重制約了草魚養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。為探討草魚脂肪蓄積及代謝調(diào)控機(jī)制，本文開展了飼料中不同非蛋白能量源對草魚生長、體脂肪蓄積、血清生化指標(biāo)及肝臟組織的影響

2、。進(jìn)而通過研究組織中脂肪代謝關(guān)鍵酶的基因表達(dá)和酶活來探討飼料中不同非蛋白能量源對草魚脂肪蓄積的主要機(jī)理，同時(shí)，研究在高糖、高脂飼料中添加氯貝丁酯對降低草魚體脂肪含量、血清生化指標(biāo)及脂肪代謝關(guān)鍵基因表達(dá)的影響。
　　1.飼料中不同非蛋白能量源對草魚生長、體組成及脂肪蓄積的影響
　　為探討飼料中不同非蛋白能量源對草魚脂肪蓄積的影響，將360尾(40.10±0.15g)草魚分為4組，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)30尾魚，分別投喂4種不同

3、非蛋白能量源(對照組6.52kJg-1、高纖維組5.32kJg-1、高糖組8.46kJg-1和高脂組8.54kJg-1)的等氮(300gkg-1)飼料，進(jìn)行為期9周的養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)。養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)結(jié)束，禁食24h，測定草魚生長指標(biāo)、飼料效率、體組成和形態(tài)指標(biāo)，并統(tǒng)計(jì)草魚各組織中脂肪含量。結(jié)果顯示，與對照組相比，增加飼料中的非蛋白能量源（高糖組和高脂組）并沒有顯著提升草魚的生長性能(P＞0.05）;而降低飼料中的非蛋白能量源（高纖維組）卻顯著降低了草

4、魚生長性能(P＜0.05）。在飼料效率和蛋白質(zhì)效率方面，含有高非蛋白能量的高糖組和高脂組與對照物顯著性差異(P＞0.05），而非蛋白能量水平較低的高纖維組較對照組有顯著性的降低(P＜0.05)。隨著飼料中非蛋白能量源水平的增加，高糖組和高脂組草魚的體脂肪含量與對照組相比有顯著的升高(P＜0.05），尤其是高脂組草魚體脂肪含量最高;與之相反，較低水平非蛋白能量的高纖維組的草魚脂肪顯著低于對照組(P＜0.05)。魚體水分含量變化與脂肪含量呈

5、相反趨勢，粗蛋白含量無顯著變化(P＞0.05）。肌肉中脂肪含量與全魚脂肪含量的趨勢一致。增加飼料中的糖類水平顯著增加草魚的肝體比(HSI)和肝臟脂肪含量(P＜0.05），而飼料中高水平的脂肪則顯著增加草魚的腸脂比(MFI)(P＜0.05)。而在產(chǎn)肉率(FI)方面各組無顯著性的差異(P＞0.05)。通過計(jì)算得出草魚肌肉、肝臟和腸系膜脂肪組織中脂肪蓄積比率，其中肌肉中脂肪含量占全魚脂肪總量的11.46％-14.54％，肝臟中脂肪含量的比率為

6、2.35％-4.85％，腸系膜中脂肪含量占全魚脂肪含量的比例范圍是22.93％-28.61％。結(jié)果表明，增加飼料中非蛋白能量源不僅不能提高草魚的生長性能，反而會增加魚體脂肪的蓄積。
　　2.飼料中不同非蛋白能量源對草魚血清生化指標(biāo)和肝臟組織的影響
　　在與實(shí)驗(yàn)一相同的條件下，檢測飼料中不同非蛋白能量源對草魚血清生化指標(biāo)和肝臟組織的影響。養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)結(jié)束后禁食24小時(shí)，每組隨機(jī)取6條魚，尾靜脈采血，肝臟采用石蠟包埋和H-E染色（蘇

7、木精-伊紅）法，在顯微鏡下觀察肝臟組織形態(tài)并拍照。結(jié)果表明，隨著飼料中非蛋白能量源含量的升高，高糖組和高脂組的血液中的TG和CHO濃度顯著高于對照組和高纖維組(P＜0.05)，而高纖維組相對于對照組有下降的趨勢但不顯著(P＞0.05）。高糖組的ALT、AST和ALP這三種酶活性顯著高于對照組和纖維組(P＜0.05），而高脂組與對照組沒有顯著性的差異(P＞0.05)。高糖組和高脂組草魚血液中的TP和BUN的濃度與對照組沒有顯著性差異(P＞

8、0.05），而高纖維組顯著性低于對照組(P＜0.05）。飼料中不同水平的非蛋白能量源對草魚血液中的TBIL和DB含量沒有顯著的影響(P＞0.05）。高纖維組的GLU濃度顯著高于對照組和高糖組(P＜0.05）。在肝臟組織學(xué)方面，高糖組的肝臟細(xì)胞嚴(yán)重腫大變形，細(xì)胞中充滿脂肪滴，細(xì)胞核擠壓至一側(cè)，甚至出現(xiàn)細(xì)胞核萎縮或消失，呈現(xiàn)透明的空泡化。高脂組的肝細(xì)胞有稍許的腫大，細(xì)胞漿內(nèi)有大小不一的脂肪滴出現(xiàn)，部分出現(xiàn)細(xì)胞核偏移和空泡化。高纖維組的肝細(xì)胞

9、排列致密整齊，肝細(xì)胞索明顯，細(xì)胞核位于細(xì)胞中央，細(xì)胞大小正常，沒有脂肪滴。因此，飼料中高糖組對草魚肝臟組織的損傷最嚴(yán)重。
　　3.飼料中不同非蛋白能量源對草魚脂肪代謝相關(guān)基因表達(dá)和酶活的影響
　　本實(shí)驗(yàn)主要通過研究草魚肝臟組織和脂肪組織中脂肪代謝主要酶的基因表達(dá)和酶活性，探討飼料中不同非蛋白能量源對草魚體脂肪蓄積的影響機(jī)理。結(jié)果表明，高糖組草魚肝臟組織中脂肪生成相關(guān)酶活性(脂肪酸合成酶FAS，乙酰輔酶A羧化酶ACC和葡萄糖-

10、6-磷酸脫氫酶G6PD)較對照組有顯著性的升高(P＜0.05），而高脂組和高纖維組則有降低。在基因表達(dá)方面，高糖組草魚肝臟組織和脂肪組織中FAS和ACC的mRNA水平顯著上調(diào)(P＜0.05），尤其是肝臟組織中FAS基因相對表達(dá)量較對照組上調(diào)了3倍多。高纖維組草魚肝臟中PPARα基因mRNA水平與對照組相比有顯著升高(P＜0.05），脂蛋白脂酶(LPL)基因相對表達(dá)在高纖維組和高脂組草魚肝臟中較對照組有顯著升高(P＜0.05），而在脂肪組

11、織中則是高糖組和高脂組均顯著升高，高纖維組則顯著下降（P＜0.05）。上述結(jié)果表明，雖然高糖和高脂飼料均能增加草魚體脂肪的蓄積，但是兩者增加脂肪蓄積的方式不同。
　　4.高糖、高脂飼料中添加氯貝丁酯對草魚體組成、血清生化指標(biāo)及脂肪代謝的影響
　　本實(shí)驗(yàn)是在高糖和高脂飼料中添加1.25gkg-1的氯貝丁酯，探討其對草魚降脂作用。實(shí)驗(yàn)魚是實(shí)驗(yàn)一結(jié)束后高糖組和高脂組的草魚(205±12g)，各分為兩組，一組投喂無氯貝丁酯飼料，一組

12、投喂添加氯貝丁酯飼料，投喂率為4％魚體重/天，草魚每天所攝取的氯貝丁酯的量為50mg/kg體重，養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)共進(jìn)行4周。養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，禁食24h，檢測體重、魚體組成、血脂含量及肝臟組織中脂肪代謝基因PPARα、CPT(I)、LPL的表達(dá)。結(jié)果表明，在高糖和高脂飼料中添加氯貝丁酯對草魚生長性狀無顯著變化，而顯著降低了草魚VSI和MFI(P＜0.05)，尤其是高脂組添加氯貝丁酯的草魚MFI降低程度較大。在體組成方面，高糖和高脂飼料中添加氯貝丁

13、酯較未添加組顯著降低了全魚、肌肉和肝臟中的脂肪含量(P＜0.05）。在血脂方面，氯貝丁酯也顯著降低了草魚血液中甘油三酯、總膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇(P＜0.05）。高糖和高脂飼料中添加氯貝丁酯使草魚肝臟中PPARα和LPL基因mRNA水平顯著上調(diào)(P＜0.05)，而CPTI基因mRNA水平各組無顯著差異(P＞0.05)。上述結(jié)果表明，在高糖和高脂飼料中添加氯貝丁酯對草魚有降脂作用。
　　5.投喂青草、蠶豆和配

14、合飼料對草魚生長、肉質(zhì)及脂肪蓄積的影響
　　本實(shí)驗(yàn)通過投喂青草、蠶豆和配合飼料3種不同的飼料來探討其對草魚生長、肉質(zhì)及體脂肪蓄積的影響。300尾草魚（均重107±1.76g）分成3組，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)30尾魚，每天投喂2次，養(yǎng)殖16周。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，攝食配合飼料組的草魚增重率和特定生長率顯著高于蠶豆組和青草組(P＜0.05)，蠶豆組草魚生長性能最低。在體形特征方面，青草組草魚VSI、HSI和MFI顯著低于其它兩組(P＜0.0

15、5)。相反，蠶豆組草魚的MFI顯著高于配合飼料組和青草組(P＜0.05）。在肌肉和肝臟組成組分方面，蠶豆組的草魚肌肉粗蛋白和粗脂肪顯著高于其它兩組(P＜0.05），青草組草魚肌肉脂肪含量最低(P＜0.05）。蠶豆組草魚肝臟中脂肪含量顯著高于其它兩組(P＜0.05），青草組最低。蠶豆組草魚的肌肉質(zhì)構(gòu)參數(shù)（硬度、彈性、粘聚性、膠著性、咀嚼性和恢復(fù)性）是最高的。在血液生化指標(biāo)方面，蠶豆組草魚血清中膽固醇、谷草轉(zhuǎn)氨酶和堿性磷酸酶含量都高于配合飼