亞硫酸鹽對(duì)肝細(xì)胞脂肪代謝相關(guān)因素的影響.pdf

1、目的:
　　 有文獻(xiàn)提示亞硫酸鈉具有致突變作用、脂質(zhì)過(guò)氧化作用，一些在體實(shí)驗(yàn)也顯示了亞硫酸鈉的肝損傷作用。本課題組在前期研究二氧化硫毒性時(shí)發(fā)現(xiàn)高濃度的二氧化硫可以引起肝細(xì)胞內(nèi)脂滴數(shù)量的明顯增加。為了進(jìn)一步研究亞硫酸鈉對(duì)肝臟脂肪代謝的干擾作用，本課題以人正常二倍體HL-7702肝細(xì)胞作為模型，檢測(cè)食品添加劑亞硫酸鈉作用肝細(xì)胞以后，肝細(xì)胞內(nèi)與脂肪代謝密切相關(guān)的分子二酰甘油酰基轉(zhuǎn)移酶1(DGAT1)、載脂蛋白E(apoE)以及載脂蛋白

2、B100（apoB100）在轉(zhuǎn)錄以及翻譯水平的變化，以期探討亞硫酸鈉誘發(fā)肝細(xì)胞脂肪積累效應(yīng)及作用途徑。
　　 方法:
　　 以正常人二倍體肝細(xì)胞株HL-7702為研究對(duì)象，經(jīng)不同濃度的Na2SO3及陽(yáng)性對(duì)照1.0mmol/L的油酸作用12 h、24h、48 h以后，采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA)檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清中載脂蛋白B100(apoB100)以及載脂蛋白E（apoE）的分泌情況;采用免疫沉淀法和Western

3、Blotting法檢測(cè)肝細(xì)胞內(nèi)DGAT1、apoB100和apoE的蛋白表達(dá)水平;采用定量聚合酶鏈反應(yīng)法(Q-PCR)檢測(cè)肝細(xì)胞內(nèi)DGAT1、apoE以及apoB100 mRNA的表達(dá)水平。
　　 結(jié)果:
　　 1、Na2SO3對(duì)肝細(xì)胞內(nèi)DGAT1 mRNA表達(dá)水平的影響:染毒12 h，2.5 mmol/L、10.0mmol/LNa2SO3組肝細(xì)胞內(nèi)DGAT1 mRNA的表達(dá)水平明顯增加，與陰性對(duì)照組比較，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意

4、義(P＜0.05);染毒24 h和48 h，僅10.0 mmol/L Na2SO3染毒組肝細(xì)胞內(nèi)DGAT1 mRNA的表達(dá)水平明顯增加，與陰性對(duì)照組比較，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 2、Na2SO3對(duì)肝細(xì)胞內(nèi)apoE mRNA表達(dá)水平的影響:染毒12h，2.5 mmol/L、10.0 mmol/LNa2SO3染毒組肝細(xì)胞內(nèi)apoE mRNA的表達(dá)水平明顯增加，與陰性對(duì)照組比較，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);染毒

5、24 h，僅10.0 mmol/L Na2SO3染毒組肝細(xì)胞內(nèi)apoE mRNA的表達(dá)水平明顯增加，與陰性對(duì)照組比較，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 3、Na2SO3對(duì)肝細(xì)胞內(nèi)apoB100 mRNA表達(dá)水平的影響:染毒12 h，2.5 mmol/L、10.0 mmol/LNa2SO3染毒組肝細(xì)胞內(nèi)apoB100 mRNA的表達(dá)水平明顯增加，與陰性對(duì)照組比較，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);染毒24 h和48 h后，

6、僅10.0 mmol/L Na2SO3染毒組肝細(xì)胞內(nèi)apoB100mRNA的表達(dá)水平明顯增加，與陰性對(duì)照組比較，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 4、Na2SO3對(duì)肝細(xì)胞內(nèi)DGAT1蛋白含量的影響:染毒12h和24 h，僅10.0 mmo/L Na2SO3處理組肝細(xì)胞內(nèi)DGAT1蛋白表達(dá)明顯升高，與陰性對(duì)照組比較，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);染毒肝細(xì)胞48 h后，10.0 mmo/L Na2SO3染毒組以及1.0

7、mmol/L油酸組肝細(xì)胞內(nèi)DGAT1蛋白表達(dá)均明顯增加，與陰性對(duì)照組比較，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 5、Na2SO3對(duì)肝細(xì)胞內(nèi)apoE蛋白表達(dá)的影響:染毒12 h和24 h，各Na2SO3染毒組以及1.0 mmol/L油酸組肝細(xì)胞內(nèi)apoE的蛋白表達(dá)水平均明顯增加，與陰性對(duì)照組比較，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）;染毒48 h，各Na2SO3染毒組肝細(xì)胞內(nèi)apoE的蛋白表達(dá)水平明顯增加，與陰性對(duì)照組比較，差別有

8、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 6、Na2SO3對(duì)肝細(xì)胞內(nèi)apoB100蛋白表達(dá)的影響:染毒12h、24 h、48 h，各Na2SO3染毒組肝細(xì)胞內(nèi)apoB100的蛋白表達(dá)水平均有明顯增加，與陰性對(duì)照組比較，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 7、Na2SO3對(duì)肝細(xì)胞培養(yǎng)上清中apoB100含量的影響:染毒12h、24 h、48 h，各Na2SO3染毒組以及1.0 mmol/L油酸組肝細(xì)胞外培養(yǎng)上清中apoB1

9、00的表達(dá)量均有明顯增加，與陰性對(duì)照組比較，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）;
　　 8、Na2SO3對(duì)肝細(xì)胞培養(yǎng)上清中apoE含量的影響:染毒24 h后，10.0 mmol/L Na2SO3處理組以及1.0 mmol/L油酸組肝細(xì)胞培養(yǎng)上清中apoE的含量明顯增加，與陰性對(duì)照組比較，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）;染毒48 h后，0.1mmol/L以及10.0 mmol/L Na2SO3染毒組肝細(xì)胞外培養(yǎng)上清中apoE的含量

10、有明顯增加，與陰性對(duì)照組比較，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　 結(jié)論:
　　 1.一定劑量的Na2SO3可增加肝細(xì)胞內(nèi)DGAT1的含量，促進(jìn)肝細(xì)胞內(nèi)甘油三酯的合成。
　　 2.一定劑量的Na2SO3可增加肝細(xì)胞內(nèi)apoE的蛋白表達(dá)量，但是對(duì)apoE的基因表達(dá)影響不明顯。表明apoE可能是通過(guò)受體途徑促進(jìn)了肝細(xì)胞內(nèi)甘油三酯的分泌外排。
　　 3.一定劑量的Na2SO3可增加肝細(xì)胞apoB100的含量