臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理資料

1、及,河南省衛(wèi)生廳臨床檢驗(yàn)中心蘇 天 水,,20世紀(jì)80年代以來,核酸分子序列分析和DNA合成自動(dòng)化技術(shù)的發(fā)展.基因分析,基因重組,基因擴(kuò)增技術(shù)廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域. 80年代后期基因擴(kuò)增技術(shù)逐漸應(yīng)用到醫(yī)學(xué)生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中.并逐步應(yīng)用到臨床.對(duì)疾病的診斷,治療.科研和預(yù)防起到積極的作用. 由于對(duì)基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)了解不足,如實(shí)驗(yàn)室環(huán)境,儀器設(shè)備,實(shí)驗(yàn)試劑,人員素質(zhì),環(huán)境污染,質(zhì)量控制等條件考慮不周.出現(xiàn)了交叉污染,檢驗(yàn)

2、結(jié)果不準(zhǔn)確等問題.因此,衛(wèi)生部于1998年下發(fā)暫時(shí)停止基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)的臨床應(yīng)用.緊接著在衛(wèi)生部的指導(dǎo)下,組織專家多次研究論證,于2002年1月14日發(fā)布,,第一章 總 則一,目的 規(guī)范臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理 保證臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量 保證臨床診斷,治療的科學(xué)性,合理性二.臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)的種類 基本原理是擴(kuò)增檢測(cè)DNA,RNA（cDNA）為方法的檢測(cè)技術(shù) 放大靶核酸

3、 聚合酶鏈反應(yīng)(PCR) 連接酶鏈反應(yīng)(LCR),,轉(zhuǎn)錄依賴的放大系統(tǒng)(TAS) 自主序列復(fù)制系統(tǒng)(3SR) 鏈替代擴(kuò)增(SDA) 放大核酸雜交鏈 b-DNA 依賴雜交鏈信號(hào) 斑點(diǎn)雜交三. 適用實(shí)驗(yàn)室 二級(jí)以上(含二級(jí))醫(yī)院設(shè)立的臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室,,核酸檢測(cè)技術(shù)分類1。靶基因擴(kuò)增聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase Chain reactio

4、n)轉(zhuǎn)錄依賴的放大系統(tǒng)(Transcription-basedAmplification System TAS, or Transcription-Mediated Amplification TMA 自主序列復(fù)制系統(tǒng)（Self-Sustained Sequence Replication 3SR) 鏈替代擴(kuò)增(Strand Displacement Amplif

5、ication SDA 核酸系列依賴性擴(kuò)增（Nucleic Acid Sequence- Based Amplification NASBA) 2 。探針擴(kuò)增。連接酶反應(yīng)（LCR）。 3。分枝狀DNA探針測(cè)定(branched DNA, b-DNA),,四.

6、 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的試劑要求 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室使用的試劑必須經(jīng)國家藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)的臨床檢驗(yàn)試劑五.質(zhì)量監(jiān)督管理 部,省.自治區(qū).直轄市臨床檢驗(yàn)中心負(fù)責(zé)對(duì)所轄行政區(qū)域內(nèi)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量監(jiān)督管理工作,,第二章 實(shí)驗(yàn)室設(shè)置和驗(yàn)收六. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)和驗(yàn)收程序 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn) (見附件),,實(shí)驗(yàn)室區(qū)域設(shè)置原則 試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū) 標(biāo)本制備區(qū)

7、 擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū) 擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)使用自動(dòng)分析儀后兩區(qū)可合并各區(qū)物品固定物流,人流單向流動(dòng) 各區(qū)設(shè)備按配置,,技術(shù)驗(yàn)收申請(qǐng)申請(qǐng)材料準(zhǔn)備（一）《醫(yī)療機(jī)構(gòu)執(zhí)業(yè)許可證》復(fù)印件;（二）擬設(shè)置基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室醫(yī)院的醫(yī)療衛(wèi)生資源狀況、對(duì)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)的需求情況以及實(shí)驗(yàn)室運(yùn)行的預(yù)測(cè)分析；（三）擬設(shè)基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置平面圖；,,（四）實(shí)驗(yàn)室主要負(fù)責(zé)人簡(jiǎn)歷表(見附表1);（五）實(shí)驗(yàn)室工作

8、人員一覽表(見附表2);（六）主要儀器設(shè)備表(見附表3);（七）擬開展的臨床基因診斷項(xiàng)目(見附表4);（八）實(shí)驗(yàn)室相關(guān)程序文件和標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）（見附表5）;（九）檢驗(yàn)報(bào)告樣單 份;（十）其它有關(guān)質(zhì)量文件名稱或證明材料。,,七. 部中心和省,自治區(qū),直轄市中心共同組織專家組按照進(jìn)行技術(shù)驗(yàn)收.驗(yàn)收后20天內(nèi)將驗(yàn)收?qǐng)?bào)告寄送至申請(qǐng)機(jī)構(gòu).八. 省級(jí)衛(wèi)生行政部門認(rèn)可 驗(yàn)收合格報(bào)告后,將驗(yàn)收材料一套送至省級(jí)衛(wèi)生行

9、政部門備案.15天未收到省廳不同意的意見.方可開展驗(yàn)收合格的臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)項(xiàng)目.九. 未經(jīng)驗(yàn)收合格并報(bào)省廳備案,醫(yī)療機(jī)構(gòu)不得開展臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn).,,第三章 實(shí)驗(yàn)室監(jiān)督管理十.臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室必須按照 開展工作十一. 實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員要求 上崗培訓(xùn) 考核合格 持證上崗 部中心備案 培訓(xùn)機(jī)構(gòu) 衛(wèi)生部

10、臨檢中心 省廳指定并經(jīng)部中心認(rèn)定的機(jī)構(gòu) 使用統(tǒng)一教材,,十二. 科研用基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室 不得向臨床出具檢驗(yàn)報(bào)告 不得向病人收取任何費(fèi)用十三. 質(zhì)量要求 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室必須做室 內(nèi)質(zhì)控 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室必須參加 部中心組織的室間質(zhì)評(píng),,十四. 部中心按照和協(xié)

11、調(diào),組織省檢驗(yàn)中心監(jiān)測(cè)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的檢驗(yàn)質(zhì)量.結(jié)果報(bào)省衛(wèi)生廳,并抄送被檢單位.十五. 部中心.省中心受上級(jí)衛(wèi)生行政部門委托可對(duì)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢查.被檢機(jī)構(gòu)不得拒絕或隱瞞. 檢查結(jié)果報(bào)上級(jí)部門,中心不具有處罰權(quán).,,十六. 質(zhì)量不合格的處理 警告 對(duì)初次不合格暫停不合格項(xiàng)目.限期整改 , 對(duì)兩次不合格的實(shí)驗(yàn)室,停止開展該項(xiàng)目。 重新恢復(fù)該項(xiàng)目必須再次進(jìn)行技術(shù)

12、驗(yàn)收.并報(bào)衛(wèi)生廳核準(zhǔn),,十七. 未經(jīng)驗(yàn)收擅自開展臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)的醫(yī)療機(jī)構(gòu)處理辦法 由縣級(jí)衛(wèi)生行政部門責(zé)令其限期改正.并可處以5000元以下罰款.情節(jié)嚴(yán)重的,吊銷其.并予以公告. 十八. 違反下列條款也要處理 超范圍開展項(xiàng)目 試劑不合格 無室內(nèi)質(zhì)控 無室間質(zhì)評(píng) 弄虛作假 科研項(xiàng)目收費(fèi) 無證上崗

13、 儀器無校準(zhǔn),,第四章 附 則十九. 采供血機(jī)構(gòu)參照本辦法執(zhí)行二十. 技術(shù)驗(yàn)收經(jīng)費(fèi)按國家有關(guān)規(guī)定執(zhí) 行二十一.本辦法由衛(wèi)生部負(fù)責(zé)解釋二十二,自發(fā)布之日起執(zhí)行,,湖北省衛(wèi)生廳文件摘錄1 三級(jí)醫(yī)院原則上可設(shè)置 各縣可選1-2所二級(jí)醫(yī)院設(shè)置 其他醫(yī)療機(jī)構(gòu)不得設(shè)置 2 對(duì)已設(shè)置或擬開展的醫(yī)療機(jī)構(gòu)要根據(jù)區(qū)域衛(wèi)生規(guī)劃設(shè)置,按規(guī)定程序申報(bào)3 申報(bào)單

14、位按行政管理程序報(bào)衛(wèi)生廳備案,經(jīng)省檢驗(yàn)中心初審后上報(bào)部中心4 必須開展室內(nèi)質(zhì)控和參加湖北檢驗(yàn)中心室間質(zhì)評(píng),質(zhì)控物由省中心統(tǒng)一管理,,臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室工作規(guī)范一.臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的規(guī)范化設(shè)置及其管理 規(guī)范化設(shè)置 1.試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū) 2.標(biāo)本制備區(qū) 3.擴(kuò)增區(qū) 4.擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū),,1.試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū): 試劑制備.試劑分裝.主反應(yīng)混合液制備

15、 2.標(biāo)本制備區(qū): 臨床標(biāo)本保存. 核酸提取.貯存. 加入擴(kuò)增管試劑的過程 3.擴(kuò)增區(qū): DNA或cDNA擴(kuò)增 4.擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū): 擴(kuò)增片段的測(cè)定,,人流物流方向 試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū) 標(biāo)本制備區(qū) 擴(kuò)增分

16、析區(qū),,,,,PCR實(shí)驗(yàn)室布局原則1，三區(qū)必須相互獨(dú)立，使用中始終保持分隔狀態(tài)。2，各區(qū)可移動(dòng)物品必須專用并有標(biāo)識(shí)3，標(biāo)本區(qū)，擴(kuò)增區(qū)等可能出現(xiàn)污染物的區(qū)域必須安裝排風(fēng)裝置。,,各工作區(qū)環(huán)境要求1 緩沖間; 更衣,換鞋,手套等2 通風(fēng), 空調(diào)3 傳遞通道(含消毒條件)4 消毒條件: 紫外燈,桌面消毒劑,5 安全措施 洗眼液等6 污物處理 次氯酸鈉先浸泡后處理,,樣品收集 分項(xiàng)登

17、記 要求唯一性編號(hào) 判斷是否合格 防止交叉污染樣品運(yùn)輸樣品貯藏,,實(shí)驗(yàn)中的質(zhì)量控制實(shí)驗(yàn)報(bào)告檢驗(yàn)結(jié)果解釋的有關(guān)問題 當(dāng)面解釋 電話詢問 記錄,,污染及解決 試劑污染 用具污染 樣品污染 環(huán)境污染

18、 防止措施 保持環(huán)境衛(wèi)生 用品徹底消毒 切斷污染途徑,,PCR檢驗(yàn)項(xiàng)目的申報(bào)和審定原則病原體無法培養(yǎng)，培養(yǎng)困難，培養(yǎng)時(shí)間太長(zhǎng)。實(shí)驗(yàn)室只能按審定的項(xiàng)目開展檢驗(yàn)需要新增項(xiàng)

19、目必須申請(qǐng)?jiān)鲅a(bǔ),,PCR實(shí)驗(yàn)室工作人員的資格和培訓(xùn)單位的審定工作人員的資格1，衛(wèi)生技術(shù)人員資格證2，PCR實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員培訓(xùn)合格證PCR實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員培訓(xùn)單位資格1，省級(jí)衛(wèi)生行政部門委托書2，衛(wèi)生部檢驗(yàn)中心認(rèn)定書,,附件：PCR實(shí)驗(yàn)室SOP文件提綱管理文件部分1 。 PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)置及管理2 。 PCR實(shí)驗(yàn)室人員配置及管理3 。實(shí)驗(yàn)人員的培訓(xùn)管理4 。儀器設(shè)備管理5 。實(shí)驗(yàn)室內(nèi)務(wù)管理,,6 。檢驗(yàn)報(bào)告單管理

20、7 。試劑準(zhǔn)備區(qū)的配置、功能及管理8 。標(biāo)本制備區(qū)的配置、功能及管理9 。擴(kuò)增區(qū)的配置、功能及管理附： 臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室規(guī)章制度 試劑準(zhǔn)備區(qū)工作制度 標(biāo)本制備區(qū)工作制度 擴(kuò)增分析區(qū)工作制度,,標(biāo)準(zhǔn)操作程序文件部分10.定量PCR擴(kuò)增儀使用、維護(hù)及校準(zhǔn)程序11.離心機(jī)使用與維護(hù)標(biāo)準(zhǔn)操作程序12.超凈工作臺(tái)使用與維護(hù)標(biāo)準(zhǔn)操作程序13.生物安全柜使用與維護(hù)標(biāo)準(zhǔn)操作程序

21、14.漩渦振蕩器使用與維護(hù)標(biāo)準(zhǔn)操作程序15.加樣器使用與維護(hù)標(biāo)準(zhǔn)操作程序16.加樣器校準(zhǔn)操作程序,,17.冰箱使用與維護(hù)標(biāo)準(zhǔn)操作程序18.紫外線消毒車使用與維護(hù)標(biāo)準(zhǔn)操作程序19.恒溫金屬浴使用與維護(hù)及校準(zhǔn)程序20.傳遞窗使用與維護(hù)標(biāo)準(zhǔn)操作程序21.儀器故障時(shí)的標(biāo)記放置標(biāo)準(zhǔn)操作程序22.臨床標(biāo)本的采集標(biāo)準(zhǔn)操作程序23.標(biāo)本驗(yàn)收和保存的標(biāo)準(zhǔn)操作程序24.標(biāo)本編號(hào)的標(biāo)準(zhǔn)操作程序25.實(shí)驗(yàn)臺(tái)放置規(guī)范程序,,26.核酸擴(kuò)增的

22、標(biāo)準(zhǔn)操作程序27.HBV核酸擴(kuò)增標(biāo)準(zhǔn)操作程序28.HCV核酸擴(kuò)增標(biāo)準(zhǔn)操作程序29.檢測(cè)結(jié)果報(bào)告程序30.實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性判斷程序31.實(shí)驗(yàn)結(jié)果保存程序32.室內(nèi)質(zhì)控操作程序33.室間質(zhì)評(píng)操作程序34.實(shí)驗(yàn)室生物安全防護(hù)程序,,35.實(shí)驗(yàn)室廢棄物標(biāo)準(zhǔn)處理程序36.實(shí)驗(yàn)室清潔標(biāo)準(zhǔn)程序37.試劑質(zhì)量檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)操作程序38.實(shí)驗(yàn)耗材質(zhì)量檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)操作程序39.實(shí)驗(yàn)耗材購買、驗(yàn)收及貯存程序40.實(shí)驗(yàn)室化學(xué)試劑貯存程序41.實(shí)

23、驗(yàn)室常用液體試劑配制操作程序42.抱怨處理程序43.應(yīng)急處理程序44實(shí)驗(yàn)室污染緊急防范程序,,附表及附圖實(shí)驗(yàn)室平面圖結(jié)果報(bào)告單模式實(shí)驗(yàn)室主要負(fù)責(zé)人簡(jiǎn)歷表實(shí)驗(yàn)室工作人員一覽表主要儀器設(shè)備一覽表擬開展臨床擴(kuò)增項(xiàng)目表冰箱溫度記錄表,,工作區(qū)溫度、濕度記錄表試劑清點(diǎn)及配置登記表標(biāo)本貯存溫度記錄表擴(kuò)增儀器運(yùn)行狀況記錄表離心機(jī)運(yùn)行狀況記錄表工作人員體檢表,,PCR實(shí)驗(yàn)室復(fù)檢重點(diǎn)項(xiàng)目 1.人員管理

24、 2.標(biāo)本管理· 3.設(shè)備管理 4.質(zhì)控管理 5.檢測(cè)方法,,6.檢驗(yàn)報(bào)告質(zhì)量 7.生物安全執(zhí)行及記錄 8.各項(xiàng)記錄規(guī)范要求