臨床基因擴增實驗室質(zhì)量管理體系的建立

1、臨床基因擴增實驗室質(zhì)量管理體系的建立,2013.10.21,,From,福建省臨床基因擴增檢驗實驗室規(guī)范化培訓(xùn)暨技術(shù)人員培訓(xùn)班衛(wèi)生部臨床檢驗中心 李金明,Contents,PCR技術(shù)介紹； 質(zhì)量管理體系的建立； 質(zhì)量保證； 質(zhì)控規(guī)則；,,,,,PCR技術(shù),,高溫,Target Sequence,Target Sequence,較低溫度,Target Sequence,

2、,最適溫度,,1,2,3,實時熒光定量PCR,模板起始濃度越高，熒光信號強度達到域值所需的循環(huán)數(shù)越少，即Ct值越小。,模板起始濃度的常用對數(shù)與Ct值呈負線性關(guān)系。,,無基因無核酸的重要性,嚴格分區(qū)（一區(qū)→二區(qū)→三區(qū)）；開窗通風(fēng)；用次氯酸鈉擦洗地面和臺面，甚至墻面；增長紫外照射的時間；用75%乙醇空中噴霧；實驗前的處理程序和實驗后的處理程序；,核酸污染的來源,臨床標本中存在的大量待測微生物科研中得到的質(zhì)?？寺∫郧胺治鲅芯康奶?/p>

3、定微生物大量存在于實驗環(huán)境中的特定微生物以前擴增產(chǎn)物的殘留污染。這也是PCR實驗室最容易產(chǎn)生的，將造成假陽性的“污染”。,Next,質(zhì)量體系文件的編寫,基本原則：最有效+符合實際；三大特性：①法規(guī)性：一旦批準必須認真執(zhí)行；②唯一性：一個檢驗活動只能有唯一的操作程序；③適用性：要符合實際，具有可操作性；SOP包含的內(nèi)容：5W+1H；SOP呈現(xiàn)方式：圖片+文字；,PCR實驗室的質(zhì)量體系文件,檢測項目的性能驗證；項目檢測的S

4、OP;儀器和設(shè)備的操作SOP；儀器和設(shè)備的維護SOP； 人員的技術(shù)檔案；各種記錄表格；,,表格記錄,,儀器設(shè)備的維護校準SOP,日維護周維護定期維護劑量單位校準廠家校準,人員的技術(shù)檔案記錄,一人一個檔案；個人基本情況；培訓(xùn)證和上崗證；論文、著作、成果等；培訓(xùn)考核記錄等；,儀器設(shè)備的技術(shù)檔案,一臺儀器一個檔案；儀器的基本情況；儀器的使用說明書；儀器校準的記錄；維修維護的記錄等；,Next,室內(nèi)質(zhì)量控制,由實

5、驗室工作人員采取一定的方法和步驟，連續(xù)評價本實驗室工作的可靠性程度；旨在監(jiān)測和控制本實驗室工作的精密度，提高本實驗室常規(guī)工作中批內(nèi)和批間樣本檢驗的一致性，以確定測定工作的結(jié)果是否可靠、可否發(fā)出報告的一項工作；改善測定精密度的措施必須首先著重在最不精密的步驟上，即對試劑準備、標本采集、核酸提取、測定方法和儀器操作寫出并嚴格執(zhí)行“標準操作程序（SOP）”。,室內(nèi)質(zhì)量控制,標本采集、運送和保存中的關(guān)鍵點:容器——密閉、一次性、無菌、無核酸

6、酶及擴增抑制物；采集方法——人員訓(xùn)練有素、防污染、保存時間和溫度；合格標本——容器完整、量夠、時間符合要求、外觀符合要求、要猜到病原體等；,,第49-51頁,為客觀比較一個實驗室的測定結(jié)果與靶值的差異，由外單位機構(gòu)，采取一定的辦法，連續(xù)和客觀地評價實驗室的測定結(jié)果，發(fā)現(xiàn)誤差并校正結(jié)果，使各實驗室之間的結(jié)果具有可比性，這是對實驗室操作和實驗方法的回顧性評價，而不是用來決定在實時的測定結(jié)果的可接受性。,室間質(zhì)量評價,,室間質(zhì)評的檔案袋,

7、申請表；接收記錄；保存記錄；實驗記錄；結(jié)果上報表；結(jié)果匯報表；分析和改進內(nèi)容；,Next,質(zhì)控規(guī)則,質(zhì)控規(guī)則的功能：判斷測定批的失控還是在控；失控處理： 查出原因；采取措施；保證消除；不再出現(xiàn)；納入標準；,防止同樣的問題出現(xiàn)第二次是質(zhì)量管理的“精髓”。,符 號 定 義12S 一個質(zhì)控測定值超出±2s控制限。13S 一個質(zhì)控測定值超出

8、±3s控制限。22S 兩個連續(xù)的質(zhì)控測定值同時超出+2s或－2s控制限。R4S 同一批測定中，兩個不同濃度質(zhì)控物的測定值之間的 差值超出4s控制限。41S 四個連續(xù)的質(zhì)控測定值同時超出+1s或－1s控制限。7T 七個連續(xù)的質(zhì)控測定值呈現(xiàn)一個向上或向下的趨勢變 化。10X 十個連續(xù)的質(zhì)控測定值同時處于均值的同一側(cè)。,

9、質(zhì)控規(guī)則的符號及其定義,“即刻法”和Levey-Jennings質(zhì)控圖法“即刻法” 的實質(zhì)是一種統(tǒng)計學(xué)方法，即Grubs異常值取舍法 ；只要有3個以上的數(shù)據(jù)即可決定是否有異常值的存在。Levey-Jennings質(zhì)控圖法：穩(wěn)定條件下，20個室內(nèi)質(zhì)控結(jié)果不應(yīng)有多于1個結(jié)果超過2SD限度；在1000個測定結(jié)果中超過3SD的結(jié)果不多于3個。,質(zhì)控方法,“即刻法”,在剛開始進行質(zhì)控時，可以采用“即刻法”進行質(zhì)控，當(dāng)日常有效測定次數(shù)超過20次