臨床基因擴(kuò)增檢驗的設(shè)置質(zhì)量管理體系的建立及技術(shù)驗收

1、臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室的設(shè)置及質(zhì)量管理體系的建立,衛(wèi)生部臨床檢驗中心 李金明,臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室的設(shè)置,依據(jù)：衛(wèi)生部頒發(fā)的《臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室管理暫行辦法》（衛(wèi)醫(yī)發(fā)[2002]10號）,臨床標(biāo)本的接收,通常的工作流程：標(biāo)本采集 血清分離 編號 保存或檢測應(yīng)在四個測定區(qū)域之外的地方或區(qū)域內(nèi)接收 接收的標(biāo)本應(yīng)收集在原始容器中在核酸提取時帶入至標(biāo)本制備區(qū),,,,什么樣的臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室

2、是最標(biāo)準(zhǔn)的？,,臨床基因擴(kuò)增實驗室設(shè)置的一般原則,各區(qū)獨立注意風(fēng)向因地制宜方便工作,“十六字口訣”,實驗室質(zhì)量管理體系的建立,質(zhì)量手冊質(zhì)量體系程序文件標(biāo)準(zhǔn)操作程序 (相關(guān)記錄表格),質(zhì)量管理的內(nèi)涵,寫你所做的做你所寫的記錄你已做的分析你已做的,怎樣編寫SOP？,,實驗室清潔SOP要點,目的:為了使實驗室臺面、地面和儀器設(shè)備在實用后，處于潔凈和無感染性狀態(tài)，以防止出現(xiàn)因儀器設(shè)備不潔影響檢測或儀器使用壽命；防止

3、因?qū)嶒炇遗_面、地面和儀器設(shè)備的生物傳染危險性造成實驗室人員感染，以及防止實驗室交叉污染而出現(xiàn)假陽性結(jié)果等。 適用范圍應(yīng)包括實驗室地面、臺面和儀器設(shè)備等的清潔。 按實驗室臺面、地面和儀器設(shè)備分開來寫各自的具體清潔方法，要具體而又有可操作性 應(yīng)規(guī)定工作人員在清潔時，必須按試劑準(zhǔn)備區(qū)?標(biāo)本制備區(qū)?擴(kuò)增(及產(chǎn)物分析)區(qū)方向進(jìn)行，不得逆行 規(guī)定每一工作區(qū)域的清潔必須使用專用的清潔用具，不得混用 規(guī)定有潛在生物傳染危險性材料濺出時的消毒清

4、潔方法,生物安全防護(hù)SOP要點,明確規(guī)定實驗室工作人員在進(jìn)行哪一類接觸到有潛在生物傳染危險性的物品和材料時，應(yīng)使用哪類個體生物安全防護(hù)設(shè)備和用具 制定實驗室內(nèi)銳器物品的使用規(guī)則 制定發(fā)生意外如手指劃破、血清濺入眼內(nèi)等情況下的處理程序 明確有潛在生物傳染危險性的廢棄物（包括廢棄臨床標(biāo)本）拿出實驗室前的消毒方法如高壓或化學(xué)消毒,儀器設(shè)備的維護(hù)和校準(zhǔn)SOP,責(zé)任人維護(hù)和校準(zhǔn)的基本方面：光路、濾光片、波長、加熱模塊的清潔、具體的校準(zhǔn)點選

5、擇（如加樣器的校準(zhǔn)體積點選擇、溫度計的校準(zhǔn)溫度點選擇等）、維護(hù)和校準(zhǔn)的具體方法包括用具 校準(zhǔn)合格的判斷標(biāo)準(zhǔn) 維護(hù)和校準(zhǔn)的間隔時間,儀器設(shè)備的操作 SOP,按照每臺儀器設(shè)備的使用說明書，將其詳細(xì)操作步驟包括開機(jī)關(guān)機(jī)次序、編程、調(diào)試、運行、計算等按實際使用中的先后順序逐項列出，最后還應(yīng)有使用的注意事項。,臨床標(biāo)本的采集、運送、接收和保存 SOP,特定標(biāo)本采集的具體方法步驟 明確規(guī)定標(biāo)本的采集容器要求 明確標(biāo)本的采集量 明確標(biāo)本采集

6、后送到實驗室檢測所能容許的最大時間間隔，亦即標(biāo)本采集后，應(yīng)在多長時間內(nèi)送至實驗室 明確標(biāo)本采集后，在送至實驗室檢測前的保存方式和條件 明確標(biāo)本從采集處運送至實驗室過程中所要求的運送條件 明確標(biāo)本接收時，簽收的程序、拒收的標(biāo)準(zhǔn)和標(biāo)本唯一編號的規(guī)則 規(guī)定標(biāo)本在實驗室內(nèi)的短期（應(yīng)有具體時間）和長期（應(yīng)有具體時間）保存條件和要求 制定保證標(biāo)本安全，即如何防止標(biāo)本丟失、掉換、變質(zhì)的措施,試劑和消耗品的質(zhì)檢 SOP,試劑質(zhì)檢的基本方面，如

7、試劑的抗干擾能力（主要是針對提取試劑），即對溶血、脂血標(biāo)本擴(kuò)增抑制作用的了解?？赏ㄟ^自行制備含已知量病毒核酸的不同程度溶血或脂血的標(biāo)本進(jìn)行質(zhì)檢。如為定量檢測試劑，還應(yīng)包括檢測的重復(fù)性、線性范圍等的質(zhì)檢，通常使用2-3份樣本進(jìn)行檢測即可。如為定性檢測試劑，則應(yīng)重點考察測定下限，可用系列稀釋的含已知量靶核酸的血清標(biāo)本進(jìn)行 核酸提取用離心管質(zhì)檢的基本方面 帶濾心吸頭的質(zhì)檢主要是濾心的密封性,項目檢測、結(jié)果判斷、解釋和報告 SOP,標(biāo)本進(jìn)入

8、實驗程序后的操作編號方式 根據(jù)所用試劑盒確定的詳細(xì)操作流程 儀器編程及文件名的編寫規(guī)則 結(jié)果判讀的流程和規(guī)則 結(jié)果分析解釋的流程 結(jié)果報告流程,實驗記錄及其管理 SOP,日常檢驗過程中應(yīng)記錄的基本內(nèi)容的規(guī)定，如儀器設(shè)備操作、維護(hù)和校準(zhǔn)過程及有關(guān)數(shù)據(jù)；檢驗試劑來源和批號；檢驗標(biāo)本的來源和唯一編號；試劑的配制；實驗環(huán)境條件的控制記錄；實驗室清潔的記錄；質(zhì)控的記錄；原始檢測數(shù)據(jù)及其推導(dǎo)記錄等 對實驗記錄者的簽名方式的規(guī)定和要求

9、實驗記錄管理的基本方面：指定專門的管理人；有專門的保存處如柜子等；記錄的登記歸檔方法；記錄的借閱及銷毀記錄；記錄保存的時間；電子記錄的備份保存具體方法及保存時間等,室內(nèi)質(zhì)量控制 SOP,明確室內(nèi)質(zhì)控物的來源及濃度 明確所選用的質(zhì)控方法 明確失控的判斷標(biāo)準(zhǔn)或所采用的失控規(guī)則 明確失控后的分析及處理措施,參加室間質(zhì)量評價 SOP,明確規(guī)定室間質(zhì)評樣本的接收記錄方式、保存條件及實驗編號規(guī)則 明確室間質(zhì)評樣本的檢測流程，要強(qiáng)調(diào)的是，室間

10、質(zhì)評樣本應(yīng)以與臨床標(biāo)本相同的方式處理和檢測 明確室間質(zhì)評樣本的報告流程，即填寫、復(fù)核和簽發(fā)如何進(jìn)行，由誰負(fù)責(zé) 明確對返回結(jié)果的分析流程和責(zé)任人 明確室間質(zhì)評檢測失敗的原因分析流程 明確如果測定準(zhǔn)確性出現(xiàn)問題后，如何針對性采取措施的流程,投訴處理 SOP,明確投拆第一接觸人對投拆的處理流程，即如何記錄、如何針對相關(guān)投訴的進(jìn)一步處理程序、是否需要報告和如何報告、以及如何向投拆人返回處理意見等。可將投拆分為不同類如對檢驗結(jié)果正確性、服

11、務(wù)態(tài)度、報告單填寫錯誤等分別編寫處理流程 投拆有效時的如何改進(jìn)和采取何種措施的具體流程。應(yīng)非常具體并具有可操作性,臨床PCR檢驗流程記錄表 檢驗日期 檢驗項目： 擴(kuò)增儀中保存文件名： 使用說明：1．本記錄表須嚴(yán)格遵循試劑準(zhǔn)備區(qū)?標(biāo)本制備區(qū)?擴(kuò)增區(qū)（產(chǎn)物分析區(qū)）單一流向移動，嚴(yán)禁逆向移動。2．各項工作執(zhí)行后，在相應(yīng)敘述前的“?”內(nèi)打“?”。3．本記錄表最后與相應(yīng)

12、的標(biāo)本接收記錄等歸檔保存于擴(kuò)增區(qū)的專用文件柜內(nèi)，以備查找。,實驗前準(zhǔn)備? 試劑在有效期內(nèi) ? 擴(kuò)增儀、加樣器和溫度計在校準(zhǔn)的有效期內(nèi)? 生物安全柜的濾膜在使用有效期內(nèi) ? 消毒溶液在有效期內(nèi)? 沖眼器內(nèi)無菌生理鹽水在有效期內(nèi) ? 離心管、帶濾心吸頭已經(jīng)過質(zhì)檢合

13、 操作者：,試劑準(zhǔn)備區(qū)（1區(qū)）實驗前 ： ? 打開通風(fēng)設(shè)備 ? 實驗臺面清潔（水或70%酒精擦拭）? 冰箱溫度：冷藏室（2~8℃） ℃； 冷凍室（?18℃?2℃） ℃? 實驗室溫度： ℃（允許范圍：10~30℃）；相對濕度： （允許范圍：30%~70%）PCR試劑來源： （可直接列出有關(guān)廠

14、家名稱） 批號： 檢驗項目： 本次實驗用量： 人份，剩余量： 人份。其他有關(guān)試劑配制：? 按XXX（將有關(guān)SOP編號列出）SOP配制1%含氯消毒液 毫升；? 按XXX（將有關(guān)SOP編號列出）SOP配制4％NaOH溶液 毫升；? 按XXX（將有關(guān)SOP編號列

15、出）SOP配制0.1%焦磷酸二乙酯 毫升；? 按XXX（將有關(guān)SOP編號列出）SOP配制 毫升；? 其他： 儀器設(shè)備使用：離心機(jī)：? 正常 ? 不正常 振蕩器：? 正常 ? 不正常實驗后：? 按XXX（將有關(guān)SOP編號列出）SOP清潔實驗室臺面、地面、加樣器和離心機(jī)，并進(jìn)行紫外照射30分鐘以上。? 按XXX（將有

16、關(guān)SOP編號列出）SOP處理實驗廢棄物。 操作者：,標(biāo)本制備區(qū)（2區(qū)）實驗前： ? 打開通風(fēng)設(shè)備 ? 實驗臺面清潔（水或70%酒精擦拭）? 冰箱（柜）溫度：冷藏室（2~8℃） ℃； 冷凍室（?18℃?2℃） ℃? 實驗室溫度：

17、℃（允許范圍：10~30℃）；相對濕度： （允許范圍：30%~70%）陽性室內(nèi)質(zhì)控物來源： 濃度及批號： 擴(kuò)增位置： 陰性室內(nèi)質(zhì)控物來源： 批號： 擴(kuò)增位置： 所取理的標(biāo)本（對應(yīng)標(biāo)本接收的唯一編號）及擬擴(kuò)增位置：19172521018263

18、11192741220285132129614223071523318162432核酸提取及加樣過程：按XXX（列出編號）SOP進(jìn)行。儀器設(shè)備使用： 生物安全柜：? 正常 ? 不正常 恒溫儀溫度校準(zhǔn)： ℃離心機(jī)：? 正常 ? 不正常 振蕩器：? 正常 ? 不正常實驗后：? 按XXX（將有關(guān)SOP編號列出

19、）SOP清潔實驗室臺面、地面及儀器設(shè)備。? 按XXX（將有關(guān)SOP編號列出）SOP處理實驗廢棄物。 操作者：,實驗室的日常工作管理,工 作 項 目 核 查 點水浴箱、微量恒溫器（加熱模塊）

20、 □校準(zhǔn)及記錄溫度 次氯酸鈉溶液 □新鮮配制生物安全柜 □先起動運行30分鐘后再開始工作 室內(nèi)質(zhì)控 弱陽性質(zhì)控（定性） □有 低、中、高濃度質(zhì)控（定量）

21、 □有 陰性質(zhì)控：原樣本 □有 經(jīng)歷提取過程的空管 □有 僅含擴(kuò)增反應(yīng)混合液管 □有實驗臺面

22、 □使用后用次氯酸鈉溶液消毒， 再用70%乙醇清潔 □紫外照射加樣器、離心機(jī)

23、 □使用后用次氯酸鈉溶液消毒， 再用70%乙醇清潔實驗室各區(qū) □遵循單一工作流向