2-7動(dòng)物微生物--病料的觸片染色及細(xì)菌的分離培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)三

1、實(shí)驗(yàn)三病料的觸片染色及細(xì)菌的分離培養(yǎng),一.實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c要求,1.培養(yǎng)無(wú)菌操作的意識(shí)2.掌握病料的正確觸片及美蘭染色方法3. 掌握病料細(xì)菌分離的操作步驟及其分區(qū)劃線,二.實(shí)驗(yàn)儀器及材料,1. 儀器：恒溫箱、顯微鏡等2 .實(shí)驗(yàn)材料： 培養(yǎng)基：麥康凱培養(yǎng)基、胰蛋白胨大豆瓊脂（TSA） 病料：豬肺、肝臟、脾臟等 酒精燈、接種環(huán)、剪刀、接種環(huán)、鑷子等 染色液：美蘭染色液,三.內(nèi)容與方法

2、,1.病料觸片染色：灼燒剪刀、鑷子從病料上剪取小塊組織→→用新鮮切面在干凈載玻片上輕觸3～4個(gè) 觸面→→自然干燥→→美蘭染色。 2.美蘭染色步驟：觸片經(jīng)過(guò)火焰固定→→滴加適量美蘭染色液覆蓋涂面→→染色3分鐘→→晾干→→鏡檢→→菌體呈藍(lán)色。,用滅菌的烙刀（趁熱）對(duì)病料的表面進(jìn)行滅菌 →→ 用滅菌的剪刀在病料上滅過(guò)菌的地方剪一切口 →→ 接種環(huán)滅菌，從切口取細(xì)菌 →→ 無(wú)菌操作進(jìn)行平板分區(qū)劃線 →→ 用過(guò)的剪刀、鑷子、烙刀、接種環(huán)等燒灼滅

3、菌 →→ 平板放入恒溫箱中 18-24 小時(shí) →→ 觀察培養(yǎng)后的細(xì)菌菌落性狀。,3.病料中細(xì)菌的分離培養(yǎng)：,4.分區(qū)劃線,① 右持接種環(huán)，燒灼冷卻后，蘸取劃線。② 左手抓握瓊脂平板，在酒精燈火焰左上方，使平板面向火焰，右手將已沾的病料接種環(huán)在瓊脂表面分區(qū)劃線③ 劃線完畢，將接種環(huán)燒灼。④將平板倒扣并做標(biāo)記，培養(yǎng)。,劃線及其結(jié)果,,分區(qū)劃線,有單菌落,劃線模示圖,有單菌落,四.結(jié)果及分析討論,1 病料觸片染色結(jié)果及其分析2 細(xì)菌培

4、養(yǎng)結(jié)果及其分析,五.注意事項(xiàng),1 病料觸片不易過(guò)厚2 無(wú)菌意識(shí)3 分區(qū)劃線時(shí)小心劃破培養(yǎng)基4 病料正確處理5 病料采集的時(shí)間，及運(yùn)輸保存,六.作業(yè),1.撰寫試驗(yàn)報(bào)告，下次上實(shí)驗(yàn)課時(shí)交。2.考核：涂片老師看后，當(dāng)場(chǎng)打分（5分）3.衛(wèi)生：包括實(shí)驗(yàn)結(jié)束后實(shí)驗(yàn)及地面衛(wèi)生，顯微鏡等實(shí)驗(yàn)儀器及試劑擺放是否標(biāo)準(zhǔn)（5分）。4 .病料中細(xì)菌分離培養(yǎng)的步驟？5 .如何做好平板的分區(qū)劃線？,培養(yǎng)基的制備,1 肉膏湯培養(yǎng)基成分：牛肉膏1g，蛋

5、白胨1g，氯化鈉1g，蒸餾水200mL。制法：將牛肉膏，蛋白胨，氯化鈉，加蒸餾水至200mL，矯正 PH7.4～7.6, 121.3℃滅菌20min即可.2 營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基成分：牛肉膏1g，蛋白胨1g，氯化鈉1g，瓊脂粉5g，蒸餾水200mL。,補(bǔ)充,制法：將上述成份用水溶解后，矯正PH7.4～7.6, 121.3℃滅菌20min即可，冷卻到不燙手，倒平板。,,,補(bǔ)充,棉塞﹑棉球制備及玻璃器皿清洗,1.棉塞制備：每人制一個(gè)2.棉

6、球制備：每人制50個(gè)3.玻璃器皿清洗 2%鹽酸浸泡過(guò)夜清水沖洗2次，烘干。參考課本227頁(yè)。,,補(bǔ)充,滅菌鍋,,安全閥,放氣閥,,,,壓力表,,設(shè)定時(shí)間溫度按鍵,,蓋子,,補(bǔ)充,,原理：在密閉的蒸鍋內(nèi)，蒸汽不能外溢，壓力不斷上升，使水的沸點(diǎn)不斷提高，從而鍋內(nèi)溫度也隨之增加。在0.1MPa的壓力下，鍋內(nèi)溫度達(dá)121℃。在此蒸汽溫度下，可以很快殺死各種細(xì)菌及其高度耐熱的芽孢。 。,,補(bǔ)充,,注意：滅菌鍋內(nèi)冷空氣要排除：原因空