2-4動物微生物--細(xì)菌病的實驗室診斷方法

1、細(xì)菌病的實驗室診斷方法,學(xué)習(xí)目標(biāo),知識目標(biāo)掌握細(xì)菌病實驗室診斷的方法理解利用各種診斷方法的進(jìn)行鑒定的意義能力目標(biāo)具備結(jié)合臨床病例設(shè)計實驗室診斷方案的能力,主要內(nèi)容,病料的采集、保存和運送細(xì)菌的形態(tài)學(xué)檢查細(xì)菌的分離培養(yǎng)生化試驗動物接種血清學(xué)試驗分子生物學(xué)技術(shù),重點與難點,重點細(xì)菌病實驗室診斷的方法難點設(shè)計實驗方案,細(xì)菌病的實驗室診斷,初診：根據(jù)流行病學(xué)、癥狀、病變等方面的疾病特征，做出初步診斷,通過實驗室診斷，確

2、定病原是否是細(xì)菌以及病原菌的類型,,實驗室診斷是在臨床診斷的基礎(chǔ)上進(jìn)行的,細(xì)菌病實驗室診斷方法,病料的采集、保存和運送細(xì)菌的形態(tài)學(xué)檢查細(xì)菌的分離培養(yǎng)生化試驗動物接種血清學(xué)試驗分子生物學(xué)技術(shù),病料的采集、保存和運送,病料采集遵循的原則防止污染 無菌采樣 適時采樣 適當(dāng)部位病料采集方法（不同病料不同方法）實質(zhì)臟器 液體材料 其他病料病料的保存和送檢,防止污染,動物剖檢個人防護(hù)和消毒動物尸體處

3、理廢棄物處理,動物剖檢,剖檢場所：應(yīng)選擇便于消毒、不滲水的解剖地點，最好有專門的剖檢場所和剖檢臺 。剖檢前，動物尸體應(yīng)浸泡消毒。,,個人防護(hù)和消毒,做好個人防護(hù)：剖檢過程中，注意個人防護(hù)。剖檢后的器械浸泡消毒后洗刷。,動物尸體焚燒爐,深埋（投入消毒藥）,動物尸體處理,焚燒或深埋：剖檢后動物尸體和病料焚燒滅菌或消毒深埋。,處理不當(dāng)會引起人和動物疫病的散播,動物或人的傳染病,,廢棄物處理,無菌采樣,目的 防止病料被污染方法

4、所用器械和器皿必須滅菌點燃酒精燈注意無菌操作,適時采樣,細(xì)菌豐富增殖時期、病料應(yīng)該新鮮：取瀕死動物或剛死亡的動物。死亡動物采集病料夏天不宜遲于6～8h，冬天不遲于24h。,適當(dāng)部位,選擇病料的部位可采用兩個原則第一原則：根據(jù)疾病的類型和表現(xiàn)采集病變最典型的部位第二原則：一般采集正常無菌的部位,典型采樣,實質(zhì)臟器的采集,剖開體腔后，立即采集，置于無菌容器內(nèi)。污染或剖開過久的被檢器官：先燒烙表面，然后在燒烙的深部取一塊實質(zhì)臟器

5、，放在滅菌容器內(nèi)。如有細(xì)菌檢驗條件，可在剖檢后直接做病料的觸片染色和細(xì)菌的分離培養(yǎng)。,液體病料的采集,膿汁、胸水一般用滅菌的棉棒或吸管吸取放入試管內(nèi)，塞好棉塞送檢。血液可無菌操作從靜脈或心臟采血，然后加抗凝劑（每1ml血液加3.8%枸櫞酸鈉0.1ml）。若需分離血清，則采血后放在滅菌的容器中，擺成斜面，待血液凝固析出血清后，再將血清吸出，置于另一滅菌試管中送檢。,其他病料的采集,皮膚要取有病變且?guī)в幸徊糠终Ｆつw的部位。被毛或羽

6、毛取病變明顯部位，并帶毛根放平皿。胎兒可將流產(chǎn)胎兒送往實驗室，也可用吸管或注射器吸取胎兒胃內(nèi)容物放入試管送檢。腸道及內(nèi)容物需選擇病變最明顯的部分，將其中內(nèi)容物去掉，用滅菌水輕輕沖洗后放平皿內(nèi)。,細(xì)菌性病料的保存和送檢,低溫保存盡快送檢做好記錄畜主姓名、動物種類、地址、發(fā)病情況、欲檢部位及檢驗項目、采集時間等,細(xì)菌的形態(tài)學(xué)檢查,方法光學(xué)顯微鏡檢查電子顯微鏡檢查意義觀察病料中有無細(xì)菌以及細(xì)菌的形態(tài)、數(shù)量、分布、結(jié)構(gòu)、種類等

7、，進(jìn)行初步判斷,細(xì)菌的分離培養(yǎng),方法：用分區(qū)劃線法在合適培養(yǎng)基上培養(yǎng)意義看培養(yǎng)基中有無細(xì)菌生長推斷是否為細(xì)菌病依據(jù)菌落的特征判斷細(xì)菌種類用菌落中的細(xì)菌進(jìn)一步作形態(tài)學(xué)鑒定可進(jìn)一步作生化鑒定、血清學(xué)鑒定及動物試驗可進(jìn)一步作藥敏試驗,分離培養(yǎng),通常選用適合目標(biāo)菌生長的平板培養(yǎng)基對細(xì)菌進(jìn)行分離培養(yǎng)。不同細(xì)菌的菌落大小、形態(tài)、色澤、表面特征、邊緣狀態(tài)、隆起度、透明度等特征不同。有的細(xì)菌在鮮血瓊脂平板上形成溶血環(huán)。 也可采用選擇培養(yǎng)

8、基或鑒別培養(yǎng)基，以起到抑制雜菌或快速鑒別的效果。比如腸道桿菌科可選擇麥康凱瓊脂、伊紅美藍(lán)瓊脂。,分區(qū)劃線法,不同細(xì)菌的菌落大小、形態(tài)、色澤、表面特征、邊緣狀態(tài)、隆起度、透明度等特征不同,不同細(xì)菌的菌落,溶血環(huán),有的細(xì)菌在鮮血培養(yǎng)基上有β-溶血現(xiàn)象,伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基、麥康凱培養(yǎng)基上大腸桿菌菌落,細(xì)菌的生化試驗,進(jìn)行生化試驗的細(xì)菌必須是純培養(yǎng)物。檢驗時，根據(jù)可疑細(xì)菌的生化特性選擇特定的一組生化試驗，將結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行對比，以確定病原菌的種類

9、。例：不同種沙門氏菌的生化鑒定,,雞白痢沙門氏菌,雞傷寒沙門氏菌,鼠傷寒沙門氏菌,不同種沙門氏菌的生化鑒定,意義將待檢細(xì)菌液接種到動物體內(nèi)，觀察動物發(fā)病情況，進(jìn)一步確認(rèn)可疑細(xì)菌的致病作用和類型。接種對象本動物試驗動物接種途徑,動物接種,常用的動物接種途徑,血清學(xué)試驗,臨床診斷中，可用于細(xì)菌的血清分型、快速診斷或大群檢疫。用已知抗體檢測動物體內(nèi)的病原菌用已知的病原菌抗原檢測動物血清中的抗體例：雞白痢的檢疫,,,,,,1、

10、加一滴抗原,2、加一滴雞的全血,3、將抗原和血液混勻,4、靜置2min,觀察結(jié)果,雞白痢檢疫—全血平板凝集試驗,,雞白痢檢疫結(jié)果,分子生物學(xué)方法,分子生物學(xué)技術(shù)對病原菌的快速診斷和不能人工培養(yǎng)的細(xì)菌的探索發(fā)揮巨大的作用。 PCR技術(shù)、核酸分子雜交技術(shù)等。,大腸桿菌病實驗室診斷方案,病料中細(xì)菌的形態(tài)學(xué)檢查,病料中細(xì)菌的分離培養(yǎng),18小時后,動物致病性試驗,涂片革蘭氏染色,生化試驗,H2S試驗,糖發(fā)酵試驗,MR試驗,10日齡小雞，皮下注