竹喙球菌拮抗細(xì)菌2-7菌株的分離及抗菌蛋白純化.pdf

1、毛竹（Phyllostachys heterocycla cypubescens）是一個地域分布廣、經(jīng)營周期短、經(jīng)濟(jì)效益高的優(yōu)良樹種。但20世紀(jì)中葉開始毛竹枯梢病相繼在各地暴發(fā)成災(zāi)，造成嚴(yán)重?fù)p失，成為我國重要檢疫性植物病害。
　　 其病原菌竹喙球菌（Ceratosphaeria phyllostachydis Zhang）是接近于高度危險的林業(yè)有害生物，對我國竹林資源與竹業(yè)發(fā)展具有潛在的嚴(yán)重威脅，應(yīng)加強(qiáng)風(fēng)險性管理力度。
　

2、　 目前生物防治被認(rèn)為是一種最具有發(fā)展?jié)摿Φ挠行Х乐畏椒ā?br>　　 本研究從土壤中分離獲得一株對毛竹枯梢病致病菌竹喙球菌具有較強(qiáng)拮抗作用的菌株2-7。通過對該菌株進(jìn)行形態(tài)特征觀察、生理生化試驗以及16SrDNA的序列比對分析，鑒定該菌株為巨大芽孢桿菌（Bacillus megaterium）。
　　 經(jīng)鹽析及有機(jī)溶劑萃取初步確定該菌株產(chǎn)生的拮抗物質(zhì)為蛋白類物質(zhì)。
　　 通過單因素試驗和正交試驗對菌株2-7搖瓶發(fā)酵

3、條件及產(chǎn)芽孢條件進(jìn)行了優(yōu)化，最終確定了其最佳發(fā)酵條件為：蔗糖3％、蛋白胨3％、MgSO4·7H2O0.05％、KCl0.05％、發(fā)酵液初始pH值為7.0、裝瓶量為250mL三角瓶裝50mL、發(fā)酵時間36h、接種量為10％。在此條件下培養(yǎng)得到的菌株2-7發(fā)酵液，經(jīng)過濾除菌后以含竹喙球菌的平板檢測其抑菌活性，抑菌圈直徑可達(dá)27.05mm。
　　 其最佳產(chǎn)芽孢條件為：1％玉米粉、1％大豆蛋白胨、0.1％CaCl2、0.05％MnSO4

4、·H2O、培養(yǎng)基初始pH值為6.0、種齡20h、裝瓶量250mL三角瓶裝50mL、接種量8％、培養(yǎng)溫度為30℃、搖床轉(zhuǎn)速200r·min-1。在此優(yōu)化條件下，2-7菌株發(fā)酵液中的芽孢數(shù)量為2×109個/mL，芽孢形成率達(dá)到了96.4％。
　　 用硫酸銨沉淀2-7菌株發(fā)酵液中的蛋白質(zhì)，透析、真空冷凍干燥后檢測活性，并對其性質(zhì)進(jìn)行了研究。該抗菌蛋白在pH8.0～11.0范圍內(nèi)具有較好的穩(wěn)定性，最適作用溫度為28℃；最適作用pH值為7