棉花黃萎菌拮抗細(xì)菌BDT-25抗菌蛋白的分離純化.pdf

1、拮抗細(xì)菌BDT-25菌株是從棉花根際土壤中分離篩選到的一株對棉花黃萎病原菌大麗輪枝菌Verticillium dahilae Kleb.的生長和微菌核形成具有強(qiáng)烈抑制作用的菌株。經(jīng)生理生化特征的鑒定，證明BDT-25菌株為枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）。此外，該菌株還對棉花枯萎病菌、棉花立枯病菌等10種其他病原真菌的生長具有顯著的抑制作用，為一株廣譜拮抗細(xì)菌菌株。
　　 采用牛津杯法測定了不同培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時

2、間、搖床轉(zhuǎn)速、培養(yǎng)基和pH等培養(yǎng)條件下對拮抗細(xì)菌BDT-25抑菌活性的影響，明確了BDT-25菌株產(chǎn)生抑菌物質(zhì)的最佳培養(yǎng)條件：采用NB液體培養(yǎng)基，在28℃、pH7、170rpm培養(yǎng)48h，所得發(fā)酵液對棉花黃萎病菌的生長抑制作用最強(qiáng)。
　　 利用氯仿、乙醚、乙酸乙酯等有機(jī)溶劑對BDT-25菌株的去菌體培養(yǎng)液中的抑菌物質(zhì)進(jìn)行提取，結(jié)果表明，利用上述有機(jī)溶劑所得到的去菌體培養(yǎng)液的提取物無抑菌作用；而經(jīng)80％硫酸銨沉淀得到的沉淀物對棉花

3、黃萎病菌具有顯著的抑制效果。進(jìn)一步研究表明，該沉淀物對RNA酶不敏感，而對高溫、胰蛋白酶、胃蛋白酶、蛋白酶K等敏感，在近中性條件下抑菌活性高而且穩(wěn)定。該結(jié)果說明BDT-25培養(yǎng)液中對V.dahliae具有抑制作用的物質(zhì)為蛋白質(zhì)類物質(zhì)。
　　 BDT-25菌株抗菌蛋白提取液脫鹽后，經(jīng)DEAE-Sepharose Fast Flow分離得到四個組分，經(jīng)抑菌活性測定得到一個抗菌活性組分，再通過Sephacry S-100凝膠過濾分離得