棉花黃萎病拮抗菌C-02的篩選、鑒定和防病增產(chǎn)效果研究.pdf

1、棉花黃萎病是棉花生產(chǎn)上主要侵染棉株維管束的真菌性病害之一，該病會引起棉花病株葉片枯萎，蕾鈴大量脫落，纖維品質(zhì)明顯下降，有些菌系甚至導(dǎo)致光桿。近年來，棉花黃萎病在我國各大棉區(qū)的發(fā)生呈現(xiàn)逐年擴(kuò)大的趨勢，嚴(yán)重的影響棉花的產(chǎn)量和品質(zhì)，對我國棉花產(chǎn)業(yè)的發(fā)展造成了重大的損失。目前，我國對棉花黃萎病的防治采用包括使用化學(xué)殺菌劑、利用拮抗菌進(jìn)行生物防治、農(nóng)業(yè)栽培措施生態(tài)防治和選育推廣種植抗病品種等多種防治方法的綜合防治措施。其中，利用拮抗菌防治棉花黃萎

2、病的生物防治因為具有環(huán)境污染少，能從源頭上控制病原菌基數(shù)，同時還可以促進(jìn)棉花生長和產(chǎn)量的提高等諸多優(yōu)點而成為研究的熱點。本次研究是從江西省和山西省兩個不同生態(tài)棉區(qū)多年連作的棉田中采集棉花黃萎病病株和健株根際土壤，從中分離出致病的棉花黃萎病菌和高效拮抗細(xì)菌，通過實驗室平板抑菌實驗和盆栽防病實驗篩選出拮抗菌，并研究拮抗細(xì)菌的抑菌防病效果和機(jī)理，研發(fā)了生防菌肥進(jìn)行了大田防病增產(chǎn)效果研究。本次研究的主要內(nèi)容和結(jié)果如下。
　　1、棉花黃萎病

3、病原菌的分離和拮抗菌的篩選。從山西省和江西省兩個不同生態(tài)棉區(qū)多年連作棉田采集病株樣品，從中分離到致病病原菌20株。病原菌致病力檢測實驗中病情指數(shù)為27.1～43.2。從健株根際土壤中分離純化拮抗細(xì)菌396株，采用平板對峙法和盆栽防病篩選相結(jié)合的方法從中篩選到3株高效拮抗細(xì)菌，分別命名為C-02、C-22和C-32。
　　2、拮抗菌C-02的鑒定和拮抗效果研究。因為C-02在初篩和復(fù)篩中表現(xiàn)出很強(qiáng)的抑菌效果，所以對C-02進(jìn)行了鑒定

4、和拮抗效果的研究。通過菌體特征、菌落培養(yǎng)特征、常規(guī)生理生化特征分析和16SrDNA序列分析相結(jié)合的方法鑒定其在細(xì)菌分類學(xué)上的地位，C-02菌株經(jīng)鑒定為枯草芽孢桿菌。通過PDA平板抑菌實驗和土培對峙培養(yǎng)抑菌實驗研究了其對棉花黃萎病病原菌菌株VD-11的拮抗效果，結(jié)果表明，PDA平板抑菌率為75％，土培對峙培養(yǎng)3d后抑菌率為100％。
　　3、拮抗細(xì)菌C-02的抑菌防病機(jī)理研究。從拮抗、競爭和誘導(dǎo)棉花產(chǎn)生抗病性三個方面就C-02的抑菌

5、防病機(jī)理展開系統(tǒng)研究。結(jié)果如下，(1)C-02分泌的抗菌蛋白能溶解VD-11細(xì)胞壁，抑制其菌絲生長和孢子萌發(fā)，大麗輪枝菌的分生孢子萌發(fā)抑制率為98.6％。證明抗菌蛋白中含有真菌細(xì)胞壁降解相關(guān)的酶，究竟為何種酶則需進(jìn)一步分離鑒定。(2)C-02分泌抗菌蛋白能極大降低病原菌VD-11致萎毒素的分泌量，但不能改變毒素的致萎性能。(3)C-02處理棉苗，PAL、POD和PPO3種酶的活性增加幅度大，維持時間長，提高了棉苗系統(tǒng)防御能力，降低了病原

6、侵染的可能性。(4)拮抗菌C-02和病原菌VD-11消耗利用不同營養(yǎng)物質(zhì)的速度存在明顯差異，拮抗細(xì)菌消耗營養(yǎng)物質(zhì)的優(yōu)勢在于利用碳源，且在48h之內(nèi)優(yōu)勢明顯。不同的氮源形態(tài)影響了其對碳源葡萄糖的消耗速度，當(dāng)?shù)礊橛袡C(jī)態(tài)氮素時，拮抗細(xì)菌消耗碳源葡萄糖的優(yōu)勢尤為明顯?？梢钥闯觯谟邢薜臓I養(yǎng)條件下拮抗菌C-02是可以通過競爭營養(yǎng)物質(zhì)來抑制大麗輪枝菌的發(fā)生的，這一點也在土培營養(yǎng)競爭抑菌實驗中得到了證實。由以上的研究可以看出，拮抗菌C-02對棉花黃