棉花黃萎病菌拮抗菌的篩選及XSZ-5菌株抑菌機制的初步研究.pdf

1、由大麗輪枝菌(Verticillium dahaliae Kleb)引起的的棉花黃萎病是棉花的主要病害，對棉花生產(chǎn)危害極大。該病為土壤傳播的真菌病害，防治難度大，目前主要采取選育選用抗病品種為主的綜合治理措施。但由于缺乏理想的高抗豐產(chǎn)品種和有效藥劑，生物防治日益受到重視。為了尋找生防菌株資源，進而研制開發(fā)防治棉花黃萎病的新型生防制劑，本學位論文對棉花黃萎病菌拮抗微生物的篩選、鑒定及拮抗作用進行了研究，并對篩選獲得的拮抗菌XSZ-5的拮抗

2、機制進行了初步探討。主要結(jié)果如下。
　　 1、從安徽各主要棉花種植區(qū)采集土樣，經(jīng)室內(nèi)分離共獲得細菌菌株120株，真菌菌株97株。以棉花黃萎病菌菌株HW、WW3為目標菌株，并以生防菌枯草芽孢桿菌BS菌株為防效對照，經(jīng)室內(nèi)初步平皿對峙試驗，發(fā)現(xiàn)其中有3株真菌菌株ZXC-9、ZZY-3、ZGC1-1和4株細菌菌株XZY-6、XSZ-5、XXX-4、XGC2-9具有很強的抑制作用。在復篩試驗中，這3種真菌菌株對棉花黃萎病菌HF菌株的抑制

3、率分別為66.58％、68.30％和76.90％，而4種細菌菌株的抑制作用與枯草芽孢桿菌BS菌株相比無顯著差異。杯碟法測定結(jié)果表明，其中XSZ-5菌株培養(yǎng)液對病原菌菌株HF和WW3均有較好的抑制效果，抑制率均在70％左右。
　　 2、根據(jù)形態(tài)特征，參照真菌分類手冊，將真菌菌株ZGC1-1和ZZY-3初步鑒定為曲霉屬真菌（Aspergillus sp），菌株ZXC-9初步鑒定為青霉屬（Penicillium sp）。參照常見細菌鑒

4、定手冊，經(jīng)過對細菌菌株XSZ-5的一系列的形態(tài)特征觀察和生理生化特征的觀察，可以初步確定其為枯草芽孢桿菌Bacillus subtilis。
　　 3、平板對峙測定表明，拮抗菌株XSZ-5對棉花黃萎病菌（V.dahaliae）、棉花枯萎病菌（Fusarium oxyporium f.sp.Vasinfectum）、棉花紅腐病菌（F.moniliforme）、水稻稻瘟病菌 (Magnaporthe grisea)、水稻惡苗病菌（F

5、.moniliforme）、小麥赤霉病菌（Gibberella zeae）、玉米莖腐病菌（F.graminearum）、玉米穗腐病菌 (F.moniliforme)、油菜菌核病菌 (Sclerotinia sclerotiorum)、煙草赤星病菌 (Alternaria alternata)、草莓灰霉病菌 (Botrytis cinerea)和牡丹根腐病菌 (F.solani)等12種病原菌都具有很好的拮抗效果，對12種病原菌的R值均較

6、?。?.160≤R≤0.544），其中以對棉花紅腐病菌的R值為最小（0.160）、對棉花黃萎病菌的R值為0.264。該菌株抑菌譜較廣，具有較大開發(fā)應用價值。
　　 4、在離體條件下，拮抗菌株XSZ-5活菌液對棉花黃萎病菌的抑制效果最好，在1：10、1：100、1：500時的抑制率分別是98％、87.5％、69％，高溫滅菌液和濾液的抑菌作用相對較差。高溫滅菌液對棉花黃萎病菌抑菌效果顯著，說明拮抗菌株XSZ-5的抗菌物質(zhì)具有一定的高

7、溫穩(wěn)定性。三者隨著稀釋比例的加大，抑制率都有所下降。
　　 5、應用弱極性有機溶劑氯仿、乙醚、乙酸乙酯從發(fā)酵液中萃取到的物質(zhì)對棉花黃萎病菌沒有抑菌活性，而水性部分有較高的抑菌活性。由強極性有機溶劑丙酮萃取到的物質(zhì)具有一定的抑菌活性，其剩余水性部分仍具有一定的活性。其結(jié)果說明，由XSZ-5所產(chǎn)生的抑菌物質(zhì)不能被弱極性有機溶劑萃取而能被強極性的有機溶劑萃取。
　　 6、硫酸銨沉淀能抑制孢子萌發(fā)和菌絲生長，因此初步確定了芽孢桿

8、菌XSZ-5菌體的抑菌物質(zhì)的性質(zhì)為多肽類的抗菌物質(zhì)。在硫酸銨飽和度為70％的時候，抑菌活性達到最大，因此可以選擇此飽和度作為以后提取有效物質(zhì)的飽和度。
　　 7、將XSZ-5菌株接搖瓶于30℃振蕩培養(yǎng)，測定其培養(yǎng)不同時間后的含菌量，繪制生長曲線。從曲線可以看出，培養(yǎng)0～6h，拮抗菌XSZ-5的菌量急劇增加，6～12h緩慢增加，12h后菌量趨于穩(wěn)定。該菌株在24～48h開始產(chǎn)生芽孢囊，48～72h成熟芽孢形成，72h芽孢形成的同步