Rab22a通過(guò)調(diào)控CD147囊泡循環(huán)促進(jìn)肺癌細(xì)胞的遷移侵襲.pdf

1、無(wú)論是在發(fā)達(dá)國(guó)家還是發(fā)展中國(guó)家，腫瘤都是導(dǎo)致人類死亡的主要原因。肺癌是最常見的腫瘤之一，每年約有180萬(wàn)人被診斷出患有肺癌。隨著空氣污染的加重，肺癌在不吸煙人群中的發(fā)病率也越來(lái)越高。目前，也有人提出把空氣污染作為肺癌發(fā)生的一個(gè)原因?，F(xiàn)在，人們正在努力尋找新的腫瘤標(biāo)志物以及新的方法，以期能夠有效地治療肺癌。
　　囊泡循環(huán)和運(yùn)輸參與了細(xì)胞各方面的行為，與細(xì)胞分化、細(xì)胞極性的丟失、細(xì)胞轉(zhuǎn)化、細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移等密切相關(guān)。囊泡運(yùn)輸過(guò)程的失衡可

2、能在腫瘤進(jìn)展中發(fā)揮重要作用。Rab22a是Ras相關(guān)小G蛋白家族的成員之一，同時(shí)也具有癌基因的作用。之前文獻(xiàn)報(bào)道Rab22a高表達(dá)于多種腫瘤中，如肝癌，黑色素瘤等。然而，Rab22a的癌基因機(jī)制并沒有報(bào)道。有研究顯示，Rab22a在內(nèi)吞囊泡循環(huán)的多個(gè)水平均發(fā)揮重要作用，它被報(bào)道可以和早期內(nèi)體或晚期內(nèi)體相互作用，但是并不能和溶酶體相互作用。激活形式的Rab22a可以和早期內(nèi)體抗原的N端相互作用，并為在早期內(nèi)體上直接募集Rabex-5，激活

3、Rab5提供了結(jié)合位點(diǎn)，建立了Rab22-Rabex5-Rab5信號(hào)通路能夠促進(jìn)早期內(nèi)體的融合。但是Rab22a通過(guò)調(diào)控囊泡循環(huán)參與腫瘤發(fā)生發(fā)展的機(jī)制尚不明確。
　　CD147，或EMMPRIN，是免疫球蛋白超家族的成員，高表達(dá)于各種上皮來(lái)源腫瘤組織和細(xì)胞，并且參與了包括腫瘤細(xì)胞生物學(xué)行為在內(nèi)的多個(gè)病理生理過(guò)程。CD147促進(jìn)MMPs和細(xì)胞因子的分泌在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。CD147能夠調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、凋亡、腫瘤細(xì)胞遷移、侵

4、襲以及細(xì)胞分化，特別是在缺氧的條件下，CD147尤為重要。缺氧能夠誘導(dǎo)CD147在癌細(xì)胞中的mRNA水平和蛋白水平的表達(dá)上調(diào)，并且上調(diào)的CD147促進(jìn)腫瘤的糖酵解。在缺氧的條件下，CD147能夠促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)，抑制腫瘤細(xì)胞凋亡，并且使其侵襲能力增強(qiáng)。已有報(bào)道CD147是非網(wǎng)格蛋白依賴的內(nèi)吞(clathrin-independent endocytosis,CIE)蛋白之一，其內(nèi)化循環(huán)過(guò)程受Rab22a及其他分子的調(diào)控。但是Rab22a參

5、與調(diào)控CD147內(nèi)化循環(huán)的機(jī)制還未闡明，同時(shí)CD147內(nèi)化循環(huán)對(duì)腫瘤發(fā)生發(fā)展的作用也未見報(bào)道。
　　本研究分三部分：
　　第一部分、Rab22a協(xié)同CD147促進(jìn)肺癌細(xì)胞的遷移侵襲。
　　我們首先在肺癌細(xì)胞系中篩選出Rab22a相對(duì)高表達(dá)的H1299細(xì)胞，干涉Rab22a抑制H1299的侵襲和遷移。對(duì)Rab22a和CD147進(jìn)行雙干涉，發(fā)現(xiàn)H1299的侵襲和遷移能力均弱于單獨(dú)干涉組。以上結(jié)果表明Rab22a可能協(xié)同CD

6、147促進(jìn)肺癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移過(guò)程。
　　第二部分、Rab22a能夠和CD147相互作用并影響CD147囊泡循環(huán)過(guò)程。
　　我們通過(guò)免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)證明Rab22a和CD147存在相互作用。通過(guò)免疫熒光和流式細(xì)胞術(shù)證明干涉Rab22a后細(xì)胞膜表面CD147減少，而細(xì)胞內(nèi)CD147增多。CD147循環(huán)實(shí)驗(yàn)直接證明了干涉Rab22a后CD147囊泡循環(huán)減弱。
　　第三部分、干涉Rab22a能夠促進(jìn)CD147時(shí)間依賴的泛素-蛋白

7、酶體降解。
　　干涉Rab22a后在不同時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)CD147水平，發(fā)現(xiàn)較長(zhǎng)時(shí)間的干涉(96h)會(huì)引起CD147下調(diào)。與此同時(shí)，CD147泛素化水平增加，而且加入蛋白酶體抑制劑MG132后CD147增多，而干涉Rab22a后，CD147并不與溶酶體發(fā)生共定位。這表明干涉Rab22a抑制了CD147囊泡循環(huán)，促進(jìn)其泛素-蛋白酶體降解。
　　綜上所述，我們發(fā)現(xiàn)Rab22a能夠促進(jìn)肺癌細(xì)胞的遷移和侵襲過(guò)程。Rab22a能夠和CD14