RILP通過與RaIGDS相互作用調(diào)控乳腺癌細胞的遷移與侵襲.pdf

1、RILP（Rab7-interacting lysosomal protein）是小分子GTP酶Rab7和Rab34的下游效應因子，其可以被活化形式的Rab7募集到晚期內(nèi)體和溶酶體膜上，并且RILP可以募集功能性的dynein-dynactin至晚期內(nèi)體和溶酶體，引起晚期內(nèi)體和溶酶體的聚集。
　　最近有研究報道，過表達RILP導致溶酶體在細胞核周圍定位，降低了前列腺癌細胞的侵襲，但機制有待于進一步研究。
　　本文通過研究RI

2、LP對乳腺癌細胞增殖、遷移、侵襲的影響，深入探討RILP對乳腺癌細胞遷移、侵襲的調(diào)控機制。本研究首先明確了過表達RILP會明顯抑制乳腺癌細胞MDA-MB-231的增殖，遷移和侵襲，而沉默RILP的表達后則會增強乳腺癌細胞MCF7的增殖，遷移和侵襲。為了研究RILP對腫瘤細胞的調(diào)控機制，我們實驗室此前用酵母雙雜交技術(shù)發(fā)現(xiàn)RILP會與Ral鳥苷酸交換因子(RalGDS)相互作用，而RalGDS蛋白是Ras下游的效應因子。本研究進一步用GST

3、-Pulldown、Co-IP技術(shù)驗證了RILP與RalGDS的相互作用，并且該兩種蛋白相互作用的區(qū)域分別是RILP的N端(1-199)和RalGDS蛋白的GEF區(qū)域。細胞免疫熒光結(jié)果顯示過表達RILP會募集RalGDS蛋白至晚期內(nèi)體/溶酶體。由于RalGDS是小G蛋白Ral的GEF(guanine nucleotide exchange factor)，本研究進一步探索了過表達RILP對RalGDS下游RalA活化的影響。研究結(jié)果表明

4、RILP通過與RalGDS蛋白相互作用從而抑制了RalGDS對RalA的激活(GTP-form)，同時還會抑制RalA下游效應因子Sec5和Exo84與RalA激活形式之間的相互作用。本研究進一步分析了過表達RILP不會影響RalA QL的活性。有趣的是，本研究還發(fā)現(xiàn)過表達RILP也會募集RalA至溶酶體。過表達RalA蛋白會使得腫瘤細胞增加侵略性，細胞形態(tài)偽足增多，然而同時過表達RILP和RalA蛋白后，腫瘤細胞的侵略性降低，細胞形態(tài)