BCL-6基因?qū)θ巳橄侔┘?xì)胞增殖、侵襲及遷移的影響及其上游調(diào)控機(jī)制.pdf

1、目的:研究BCL-6基因?qū)θ巳橄侔┘?xì)胞增殖、侵襲及遷移的影響及其上游調(diào)控機(jī)制。
　　方法:
　　1.應(yīng)用qRT-PCR技術(shù)檢測兩株正常乳腺細(xì)胞和六株乳腺癌細(xì)胞中BCL-6mRNA的表達(dá)情況。從六株乳腺癌細(xì)胞中篩選出BCL-6高表達(dá)和低表達(dá)的兩株乳腺癌細(xì)胞進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。
　　2.通過MTT、Soft Agar和Transwell體外功能實(shí)驗(yàn)檢測BCL-6對人乳腺癌細(xì)胞增殖、非錨定生長、侵襲及遷移能力的影響。
　　

2、3.采用裸鼠實(shí)驗(yàn)觀察BCL-6對裸鼠體內(nèi)成瘤能力的影響。
　　4.應(yīng)用生物信息學(xué)方法及雙熒光素酶報告實(shí)驗(yàn)(Luciferase assay)預(yù)測并驗(yàn)證潛在靶向BCL-6的miRNA。
　　5.通過qRT-PCR和western-blot方法檢測轉(zhuǎn)染靶向BCL-6miRNA mimics后BCL-6mRNA和蛋白的表達(dá)情況。
　　結(jié)果:
　　1.qRT-PCR結(jié)果顯示,BCL-6mRNA在六種乳腺癌細(xì)胞株中的表達(dá)均

3、明顯高于兩種正常乳腺細(xì)胞(P<0.05);從六株乳腺癌細(xì)胞中篩選出BCL-6高表達(dá)的T47D和低表達(dá)的MCF-7兩株乳腺癌細(xì)胞進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。
　　2.體外功能實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,BCL-6能夠促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的增殖、非錨定生長、侵襲及遷移的能力。
　　3.體內(nèi)裸鼠實(shí)驗(yàn)表明,注射了BCL-6穩(wěn)定表達(dá)的MCF-7細(xì)胞的裸鼠,所形成的腫瘤體積明顯大于對照組(P<0.05)。
　　4.生物信息學(xué)方法預(yù)測發(fā)現(xiàn)miR-339-5p是潛在