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文檔簡介
1、本試驗利用PCR技術(shù)擴增了標準血清2型RA的42KDa外膜蛋白基因片段(OmpA-2)1045bp，與原核表達載體pGEX-4T-1連接構(gòu)建重組表達載體，轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL21菌株中，在1mM的IPTG誘導下，表達融合蛋白，誘導后5h蛋白表達量達到高峰。融合表達蛋白GST-OmpA1-2的分子量約為65KDa，以包涵體形式存在?！ ∫悦撗跄懰徕c(DOC)洗滌包涵體，然后用N-十二烷基肌氨酸鈉(SKL)溶解，將溶解包涵體進行透析復性。分別
2、用親和層析法、電洗脫法和研磨法對GST-OmpA1-2融合蛋白進行了純化，親和層析純化效果不佳，電洗脫法和研磨法則獲得了較好的純化效果?！ ST-OmpA1-2融合表達蛋白免疫鴨，采血分離血清。GST-OmpA1-2以0.85μg/mL的濃度包被酶標反應板，鴨抗2型RA陽性血清進行200×稀釋，HRP-山羊抗鴨IgG作5000×稀釋，建立間接ELISA方法檢測免疫鴨的抗體水平。間接ELISA和Western-blotting試驗結(jié)
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