鴨源se和s.typhi的rapd分析及se外膜蛋白基因克隆和原核表達(dá)

1、四川農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文鴨源SE和S.typhi的RAPD分析及SE外膜蛋白基因克隆和原核表達(dá)姓名：曹平申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：汪銘書;程安春20080601四川農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文A B S T R A C TS t u d y o n S E ， S ．t y p h i f r o mD u c k sw i t h R a n d o mA m p l i f i e dP o l y m o r p h i

2、 cD N A ( R A P D ) ，C l o n i n ga n dp r o k a r y o t i C e x p r e s s i o n o fO M P g e n e f r o m S EC a o P i n g ( P r e v e n t i v eV e t e r i n a r yM e d i c i n e )S u p e r v i s e db yP r o f e s s o rW

3、 A N G M i n g s h u a n dP r o f e s s o rC H E N G A n c h u n( 1 ．A v i a nD i s e a s eR e s e a r c hC e n t e r , C o l l e g eo f V e t e r i n a r yM e d i c i n e o f S i c h u a nA g r i c u l t u r a lU n i v

4、e r s i t y , Y a ’a l l6 2 5 0 1 4 ，C h i n a ；2 ．S i c h u a nK e y L a b o r a t o r yo f A n i m a lD i s e a s e a n dH u m a n H e a l t h ，Y a j a n6 2 5 0 1 4 ，C h i n a )T h i s s t u d y c o n c e n t r a t e s

5、o n ：’1 - S t u d y o nS E ， S ．t y p h if r o mD u c k s w i t hR a n d o mA m p l i f i e d P o l y m o r p h i cD N A ( R A P D ) T h e r a n d o ma m p l i f i e d p o l y m o r p h i cD N A ( R A P D ) ，w a s u s e

6、di nt h i sp a p e rt o s t u d y t h e g e n e t i c d i v e r s i t y a m o n g S a l m o n e l i a e 1 1 t e r i t i d i S a n dS ．t y p h i m u r i u m ．T h e r e s u l t s s h o w e dt h a t ：( 1 ) T h ea r b i t r

7、a r yp r i m e r st h a tc s _ r l u s e db y c l u s t e ra n a l y s i s i n ga r eA 0 5 、C 1 4 a n dC 1 7 i n t h e s ea r b i t r a r yp r i m e r s ．( 2 ) T h e l e n g t ho f a l l a m p l i f i c a t i o np r o d

8、u c t sa r eb e t w e e n0 ．2 —0 ．3 k b ．( 3 ) C l u s t e ra n a l y s i Sa r e c o n d u c t e df o ra m p l i f i c a t i o np r o d u c t so ft h r e ep r i m e r s ，a n d t h e r e s u l t sa c c o r d e dw i t h t

9、r a d i t i o n a lC l a s s i f i c a t i o n ．( 4 ) B a s i c a l l y ，i tc a n c l u s t e r t h ei s o l a t e sf r o md i f f e r e n ta r e a s ，b u tG H I 、G H 2 、G H 3 c l u s t e rw i t h X J f i r s t l y a t s

10、 i m i l a r i t yc o e f f i c i e n t 0 ．9 2 4 6 ，t h e nc l u s t e rw i t hG H 4 、5 、6 、7 、8 、9 、1 0 、1 1 a t s i m i l a r i t yc o e f f i c i e n t0 ．9 1 3 82 ．C l o n i n ga n d p r o k a r y o t i c e x p r e s

11、s i o no f O M P g e n ef r o mS E T w op a i rp r i m e r sw e r e d e s i g n e da c c o r d i n gt o n u c l e o t i d e s e q u e n c e o f S Ew h i c hw a ss u b m i t t e dt oG e n B a n kw i t ha c c e s s i o nn

12、u m b e ro f A F l 0 2 5 5 6 ．T h eO M Pg e n ew a so b t a i n e db y P C R w i t ht h eS Ei s o l a t e df r o md u c k sa st e m p l a t ea n dC l o n e di n t op M D l 8 一rv e c t o r ．I tw a s i d e n t i f i e db y

13、P C R ，r e s t r i c t i o ne n d o n u c l e a s ea n a l y s i S ，D N As e q u e n c i n ga n dt h e ns u b c l o n e di n t oE c o RI ／X f i o I s i t eo fp r o k a r y o t i ce x p r e s s i o nv e c t o rp E T 一3 2

14、a ( + ) a n d r e c o m b i n a n te x p r e s s i o np l a s m i dp E T - 3 2 a - O M P w a sc o n s t r u c t e ds u c c e s s f u l l y ．T h ep l a s m i d w a st r a n s f o r m e d i n t oE s c h e r c h ac o l iB L

15、 2 1 ( D E 3 ) a n d 5 5 k D0 M Pr e c o m b i n a n tp r o t e i nw a se x p r e s s e dw i t hI P T Gi n d u c e r ．T h ee x p r e s s i o n p r o d u c t w e r em a i n l yn o n —s o l u b l ei n c l u s i o nb o d y

16、．T h er e c o m b i n a n t p r o t e i n w a sp u r i f i e d ．T h er e s u l t so f i m m u n o b l o t t i n gt e s ts h o w e dt h a tt h er e c o m b i n a n t p r o t e i n h a d g o o di m m n u o g e n i c i t yw