蛻皮甾酮對3T3-L1胰島素抵抗模型細(xì)胞GLUT4和PPARr蛋白及PPARrmRNA的影響.pdf

1、目的:經(jīng)過誘導(dǎo)3T3-L1前脂肪細(xì)胞（小鼠胚胎成纖維細(xì)胞）使其分化成熟為脂肪細(xì)胞，選取生長滿足實(shí)驗(yàn)條件的細(xì)胞，按濃度使用含游離脂肪酸(FFA)液孵育培養(yǎng)，使成為胰島素抵抗(IR)細(xì)胞模型，再進(jìn)一步使用蛻皮甾酮(ECR)和吡格列酮(pioglitazone)對其增殖分別進(jìn)行干預(yù)并比較對照，繼而來探討ECR對體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中對IR模型的影響和作用的強(qiáng)度。觀測的目標(biāo)我們選取兩種蛋白:葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)子4(GLUT4)和過氧化物酶體增殖物激活受體γ（P

2、PARγ），一個(gè)基因:轉(zhuǎn)錄因子PPARγ mRNA。通過分析比較蛻皮甾酮對以上三種因子表達(dá)的影響，來探討蛻皮甾酮影響上述因子表達(dá)的部分機(jī)制。
　　方法:用DMEM（high glucose）培養(yǎng)液常規(guī)培養(yǎng)3T3-L1前脂肪細(xì)胞，每隔48小時(shí)按要求換液一次，當(dāng)細(xì)胞融合48小時(shí)后，用含有IBMX（3-Isobutyl-1-methylxanthine，1-甲基-3異丁基黃嘌呤）+DEX（dexterity，地塞米松）+INSULIN的

3、DMEM（high glucose）培養(yǎng)液培養(yǎng)2天，然后換10μg/ml INSULIN培養(yǎng)液再培養(yǎng)6-8天;最后以完全培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，2天換液一次，共誘導(dǎo)分化12-14天，至完全分化成3T3-L1脂肪細(xì)胞;然后更換為含有胎牛血清(BSA，2g/L)的高糖DMEM（high glucose）培養(yǎng)液培養(yǎng)3T3-L1脂肪細(xì)胞12h后，更換成為已添加有PA(0.5mmol/L)、FAF BSA(10g/L)的DMEM培養(yǎng)液過夜(24h)，IR

4、細(xì)胞模型成功建模。加不同濃度ECR及pioglitazone(1×10-5mol/L)孵育，24小時(shí)。提取相關(guān)物質(zhì)，適當(dāng)處理后使用Western blot法檢測二種蛋白（GLUT4，PPARγ）的表達(dá)水平。用RT-PCR檢測一個(gè)基因（PPARγ mRNA）的表達(dá)程度。分組:第(1)組:3T3-L1脂肪細(xì)胞，定名稱為空白對照組;第(2)組:游離脂肪酸(FFA)誘導(dǎo)的IR模型細(xì)胞，為模型組;第(3、4、5)組:為ECR1×10-7 mol/

5、L低濃度組、ECR1×10-6 mol/L中濃度組、ECR1×10-5 mol/L高濃度組，分別稱為ECR低、中、高濃度組;第(6)組:吡格列酮濃度為1×10-5mol/L，定名為吡格列酮組。
　　結(jié)果:細(xì)胞培養(yǎng)、造模及干預(yù)過程中細(xì)胞生長良好，對濃度在1×10-7～1×10-5mol/L的ECR，實(shí)驗(yàn)細(xì)胞表現(xiàn)出良好的適應(yīng)性;與第(2)組相比較，在1×10-7～1×10-5mol/L濃度范圍的ECR及1×10-5mol/Lpiogl

6、itazone，可使胰島素抵抗模型細(xì)胞相關(guān)蛋白（GLUT4，PPARγ）及基因(轉(zhuǎn)錄因子PPARγ)的表達(dá)量增加。
　　結(jié)論:(1)濃度在1×10-7～1×10-5mol/L的ECR，均可增加IR模型細(xì)胞的葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)子4(GLUT4)蛋白的表達(dá);濃度在1×10-5mol/L的pioglitazone增加IR模型細(xì)胞的GLUT4蛋白的表達(dá);濃度在1×10-5mol/L的ECR及pioglitazone增加IR模型細(xì)胞的GLUT4蛋白

7、的表達(dá)作用相當(dāng)(P=0.234)。(2)濃度在1×10-7～1×10-5mol/L的ECR，均可增加IR模型細(xì)胞的PPARγ蛋白的表達(dá);濃度在1×10-5mol/L的pioglitazone增加IR模型細(xì)胞的PPARγ蛋白的表達(dá);濃度在1×10-5mol/L的ECR及pioglitazone增加IR模型細(xì)胞PPARγ蛋白的表達(dá)作用差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.009)。(3)濃度在1×10-7～1×10-5mol/L的ECR，均可增加IR模