放射上調(diào)胸腺嘧啶磷酸化酶使人胰腺癌細胞化療增敏.pdf

1、研究目的：建立人胰腺癌細胞5-氟尿嘧啶(5-FU)耐藥株；觀察不同放射劑量照射后，耐藥株和親株中胸腺嘧啶磷酸化酶的表達情況；證實低劑量放射可上調(diào)胸腺嘧啶磷酸化酶的表達，且使序貫的5-FU對腫瘤細胞產(chǎn)生更強的生長抑制作用。 研究方法：在體外，反復(fù)用5-FU處理AsPC-1后使其獲得耐藥性。給予耐藥株AsPC-15Fures和其親株不同的放射劑量和/或5-FU干預(yù)，利用Wst-1方法檢測細胞的增殖情況。為了證明胸腺嘧啶磷酸化酶的表達

2、增加可使胰腺癌細胞化療增敏，借助蛋白印跡法觀察，放射后不同時間點細胞內(nèi)胸腺嘧啶磷酸化酶的表達變化；將TPsiRNA轉(zhuǎn)染胰腺癌細胞，檢測在相同的放射、5-FU或聯(lián)合序貫干預(yù)后的變化。 結(jié)果：經(jīng)5-Fu周期性誘導(dǎo)可獲得5-Fu耐藥株，AsPC-1和AsPC5-Fures的5-FUIC50，分別為157.138μM和1173.989μM，具有統(tǒng)計學(xué)差異；AsPC4—Fures還具有放射交叉耐受性。與2Gy相比，單獨的0.05Gy放射僅

3、輕度抑制5-FU耐藥株的生長；給予0.05Gy與5-FU序貫處理后，增強了對5-FU耐藥株的生長抑制作用，0.05Gy聯(lián)合5-FU組較于單獨應(yīng)用5-Fu組，AsPC5-Fures的抑制率提高了23.94％；而在2Gy聯(lián)合5-Fu組，抑制率上升了32.62％；與對照組比較，兩者的p＜0.001。蛋白印跡實驗結(jié)果提示，上述的增敏現(xiàn)象與胸腺嘧啶磷酸化酶的時間依賴性上調(diào)表達有關(guān)；借助RNA干擾技術(shù)，將人胰腺癌細胞中胸腺嘧啶磷酸化酶的表達關(guān)閉，這

4、種增敏現(xiàn)象隨即消失。 結(jié)論：通過體外實驗，我們發(fā)現(xiàn)：0.05Gy，2Gy可以上調(diào)AsPC-1及其5-FU耐藥株的TP表達水平，且在耐藥株中更為明顯；通過上調(diào)TP的表達，低劑量照射0.05Gy與2Gy一樣，可促進5-FU對胰腺腫瘤細胞的殺傷；低劑量照射0.05Gy與常規(guī)劑量2Gy一樣，可以抑制胰腺腫瘤細胞的生長；AsPC-1株的5-FU耐藥性與大劑量放射耐受性有交叉耐受現(xiàn)象。 人胰腺腺癌5-FU耐藥細胞株可經(jīng)低劑量放射獲得