CD4OL基因和尿嘧啶核苷磷酸化酶基因的抗腫瘤機制的研究.pdf

1、卵巢癌是婦科最常見的一種惡性腫瘤，具有惡性程度高，早期不易發(fā)現(xiàn)，易復發(fā)轉移等特點。雖然卵巢癌的治療手段如手術切除、放射治療和化學治療等常規(guī)治療方法均有一定程度的進展，但其高復發(fā)率和容易轉移等問題仍不能解決，致使5年生存率始終維持在30％左右，嚴重威脅著廣大婦女的生命健康。雖然經(jīng)根治性手術治療或手術后輔助放化療在一定程度上減少了卵巢癌的復發(fā)，但殘余病灶的存在往往增加了化療的負擔和復發(fā)的幾率，尤其是廣泛腹腔播散的晚期卵巢癌患者，預后極差。因

2、此，作為對傳統(tǒng)療方法的補充，用以改善晚期和復發(fā)患者預后的新療法的研究勢在必行。許多研究提示，對于殘余癌灶較少的患者，在手術后經(jīng)輔助化療，再用基因修飾的腫瘤細胞作為腫瘤疫苗進行免疫生物治療，或采用腫瘤的抑癌基因等治療策略對于改善患者預后，降低復發(fā)率具有潛在的良好的應用前景。因此，探索腫瘤細胞增殖和轉移抑制劑、分化誘導劑、放化療增敏劑，基因治療、干細胞治療、免疫生物治療等卵巢癌的新療法非常迫切。 目前，手術、化療和放療仍是卵巢癌的主

3、要治療手段，但是都存在一定的局限性。腫瘤的免疫基因治療不僅能提高宿主的免疫能力和特異性殺傷腫瘤細胞的能力，而且對正常組織細胞有較少的毒副作用，因此，越來越受到人們的重視。近年來，隨著基因轉移技術的進展和人們對淋巴細胞激活途徑的進一步認識，采用細胞因子基因或其它外源性基因治療腫瘤成為備受關注的腫瘤治療策略之一。外源性免疫相關基因在腫瘤細胞的表達可通過提高宿主的免疫反應產(chǎn)生抗腫瘤效應，尤其是細胞因子基因可促使靜止期T細胞分化成輔助性T細胞(

4、Th)，從而有效激活T細胞介導的細胞免疫反應。研究表明，可采用病毒和非病毒載體將基因轉染到卵巢癌等不同的細胞中，用于基因治療研究。病毒載體包括腺病毒、腺相關病毒、重組腺病毒、反轉錄病毒、單純性皰疹病毒、細小病毒載體等；非病毒載體包括以質粒等為基礎的載體發(fā)送。雖然有報道提出，腺病毒本身的纖維結構可誘發(fā)非特異性免疫刺激而限制了它的臨床應用，但是，動物實驗和早期臨床實驗均未發(fā)現(xiàn)有明顯的炎癥反應和細胞免疫介導的限制體內(nèi)轉基因的表達和應用。此外，

5、載體為腫瘤細胞或負載腫瘤抗原的DC時，在表達外源性基因的同時還可提供特異性抗原，誘導產(chǎn)生特異性抗腫瘤免疫反應。 CD40是Koho于1984年在人的膀胱癌細胞中發(fā)現(xiàn)的一種細胞表面分子，是一種糖基化的Ⅰ型跨膜糖蛋白，屬于腫瘤壞死因子受體超家族成員。經(jīng)研究證實，CD40表達于多種正常細胞，如B細胞、單核細胞、樹突狀細胞、造血前體細胞、內(nèi)皮細胞、成纖維細胞、上皮細胞等；在多數(shù)腫瘤細胞中也呈高表達狀態(tài)，如肺癌、乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、

6、結腸癌、腎癌細胞等。作為CD40配體的CD40L主要表達于活化的CD4+T細胞表面，在活化的CD8+T細胞、肥大細胞、嗜堿性粒細胞、嗜酸性粒細胞、NK細胞、單核細胞、基質細胞表面也有表達，屬TNFR超家族成員。CD40L由261個氨基酸組成，分子量39KDa，是Ⅱ型跨膜糖蛋白，它的細胞外功能區(qū)與TNF有許多氨基酸同源性，也被認為是TNF超家族成員之一。 大量的研究結果表明，CD40與CD40L的相互作用是特異性免疫應答及其調控過

7、程中重要的共刺激信號，而且在炎癥、自身免疫病、移植免疫和血液系統(tǒng)腫瘤等病理過程及疾病的治療中有重要的作用。CD40-CD40L連接反應與T細胞對抗原的識別、IL-12等細胞因子的分泌、Th1免疫反應、前炎癥細胞因子的產(chǎn)生有重要作用，并有利于T細胞與抗原提呈細胞相互作用所需共刺激分子如CD86等的表達。目前已經(jīng)證實，多種惡性腫瘤細胞有CD40的表達，但CD40的信號激發(fā)在腫瘤生物學中的作用尚存在不同看法。CD40與腫瘤血管形成有關，可促進

8、腫瘤細胞的生長；CD40信號激發(fā)后可產(chǎn)生直接或間接的抗腫瘤作用。在乳腺癌、膀胱癌等上皮性腫瘤細胞及某些B細胞腫瘤中，CD40分子激發(fā)后，與CD40L相互作用可明顯抑制腫瘤細胞的生長、誘導腫瘤細胞凋亡。因此，CD40L是抗腫瘤免疫中一個重要的治療靶點。 腫瘤的系統(tǒng)免疫應答需要許多步驟，其中抗原遞呈過程是免疫應答過程中的重要步驟之一。樹突狀細胞(dendriticcell，DC)是專職抗原遞呈細胞，它能把腫瘤抗原遞呈給T細胞，產(chǎn)生特

9、異性細胞免疫反應，并可避免產(chǎn)生免疫耐受。體內(nèi)大部分的DC處于非成熟狀態(tài)，表達低水平的共刺激分子和粘附分子，在體內(nèi)外激發(fā)同種混合淋巴細胞反應的能力較低，但具有極強的抗原吞噬能力。不成熟的DC在攝取腫瘤抗原后，必須被活化信號激活變成成熟DC才能將抗原提呈抗原給T細胞，而這一活化過程需要一系列刺激信號，如腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、脂多糖(LPS)等。用抗CD40抗體和可溶性CD40L可激活CD40介導的信號通路，從而激活DC并使之成熟，

10、成熟DC分泌一系列細胞因子，如白介素(IL)-12、IL-6、IL-8、TNF-α和VEGF等，這些細胞因子又可促進靜止T細胞分化成T輔助細胞(Th)。因此，DC上的CD40/CD40L連接反應是發(fā)動細胞免疫反應的初始過程。 有研究證實，非淋巴組織中CD40L基因的表達也可激活機體的系統(tǒng)免疫反應。Noguchi等研究證實，將CD40L基因導入肺癌組織可誘導機體產(chǎn)生抗腫瘤免疫反應。CD40L基因治療已應用于臨床治療慢性淋巴細胞白血

11、病。對CD40L介導的抗腫瘤免疫反應機制研究結果顯示，CD40L可通過與CD40的特異性結合反應激活DC，進一步增強CTL的活性，增強腫瘤細胞的免疫原性，克服腫瘤細胞對CD4+和CD8+的免疫耐受，從而增強抗腫瘤免疫。但是，CD40L基因的抗腫瘤效果和作用機制，如誘導DC對抗原提呈功能的影響，對T細胞免疫功能和細胞因子如IL-12、IL-23、IL-27分泌等的影響仍不十分清楚。綜上所述，探討CD40L基因及其瘤苗在卵巢癌治療中的效果及