脂代謝紊亂對腎小管上皮細(xì)胞hUAT基因表達(dá)的影響.pdf

1、目的：觀察不同濃度脂蛋白和游離脂肪酸對腎小管上皮細(xì)胞(HK-2細(xì)胞)人尿酸鹽轉(zhuǎn)運子(humanuratetransporterhUAT)mRNA表達(dá)的影響。方法：所有實驗均在體外培養(yǎng)的HK-2細(xì)胞上進(jìn)行。根據(jù)培養(yǎng)液中所含脂蛋白和游離脂肪酸的不同，將HK-2細(xì)胞分為6大組。其中對照組根據(jù)添加乙醇與否分為C1、C2組，脂蛋白處理組根據(jù)脂蛋白濃度的不同再分為1、2、3、4組，游離脂肪酸處理組根據(jù)游離脂肪酸濃度的不同再分為1、2、3組。①對照組

2、：C1組：DMEM/F-12C2組：DMEM/F-12+1％(V/V)乙醇②低密度脂蛋白(LDL)組：L1組：DMEM/F-12+50ug/mlLDLL2組：DMEM/F-12+100ug/mlLDLL3組：DMEM/F-12+200ug/mlLDLL4組：DMEM/F-12+400ug/mlLDL。③高密度脂蛋白(HDL)組：H1組：DMEM/F-12+50ug/mlHDLH2組：DMEM/F-12+100ug/mlHDLH3組：DM

3、EM/F-12+200ug/mlHDLH4組：DMEM/F-12+400ug/mlHDL。④極低密度脂蛋白(VLDL)組：V1組：DMEM/F-12+50ug/mlVLDLV2組：DMEM/F-12+100ug/mlVLDLV3組：DMEM/F-12+200ug/mlVLDLV4組：DMEM/F-12+400ug/mlVLDL⑤油酸(0A)組：A1組：DMEM/F-12+100umol/lOA+1％(V/V)乙醇A2組：DMEM/F-1

4、2+200umol/lOA+1％(V/V)乙醇A3組：DMEM/F-12+400umol/lOA+1％(V/V)乙醇⑥軟脂酸(PA)組：P1組：DMEM/F-12+100umol/lPA+1％(V/V)乙醇P2組：DMEM/F-12+200umol/lPA+1％(V/V)乙醇P3組：DMEM/F-12+400umol/lPA+1％(V/V)乙醇。每種條件下，均培養(yǎng)6瓶細(xì)胞取均數(shù)，培養(yǎng)48小時，收集細(xì)胞，計數(shù)，抽提總RNA。取1ugRNA

5、逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，熒光定量PCR共擴(kuò)增hUAT和內(nèi)參照GAPDH目的片段，分析計算hUATmRNA相對表達(dá)量。整個實驗過程重復(fù)一次。統(tǒng)計學(xué)分析采用t檢驗和單因素方差分析，顯著性標(biāo)準(zhǔn)為P＜0.05。結(jié)果：①所有標(biāo)本均能檢測到hUATmRNA的表達(dá)。②干預(yù)48小時后，隨LDL濃度的增加，hUATmHNA表達(dá)水平下降；對照組hUATmRNA表達(dá)水平明顯高于L1、L2、L3、L4組，差異有顯著性(P=0.000)，除L2組和L3組之間差異無顯著

6、性(P=0.440)及L3組和L4組間差異無顯著性(P=0.158)外，余各組間差異均有顯著性(P＜0.05)。③隨著VLDL濃度的增加，hUATmRNA表達(dá)水平明顯下降；對照組hUATmRNA表達(dá)水平明顯高于V1、V2、V3、V4組，差異有顯著性(P=0.000)，V3組和V4組間差異無顯著性(P=0.056)，余各組間差異均有顯著性(P＜0.05)。④隨HDL濃度的增加，hUATmRNA表達(dá)水平下降；對照組hUATmRNA表達(dá)水平明

7、顯高于H1、H2、H3、H4組，差異有顯著性(P=0.000)，H1組和H2組間差異無顯著性(P=0.258)，H3組和H4組間差異無顯著性(P=0.521)，余各組間差異均有顯著性(P＜0.05)。⑤干預(yù)48小時后，C1與C2組hUAT表達(dá)水平差異無顯著性(P=0.342)。隨著PA及0A濃度的增加，hUAT表達(dá)水平無明顯變化，對照組hUAT的表達(dá)水平與PA及0A各濃度組間差異均無顯著性(P＞0.05)。結(jié)論：VLDL，LDL，HDL