CD40信號(hào)激活對(duì)腎小管上皮細(xì)胞的影響.pdf

1、目的：共刺激分子CD40屬于腫瘤壞死因子受體(TNF-R)超家族成員，與CD154(即CD40L)相互作用作為淋巴細(xì)胞激活的第二信號(hào)對(duì)T、B細(xì)胞的活化，尤其是B細(xì)胞的增殖分化、抗體的產(chǎn)生及同種類型轉(zhuǎn)換關(guān)系密切，在T細(xì)胞的效應(yīng)性細(xì)胞因子的分泌過(guò)程中也起重要調(diào)節(jié)作用。CD40除表達(dá)于免疫細(xì)胞以外，亦可表達(dá)于多種組織細(xì)胞上，如腎小管上皮細(xì)胞，并參與了多種腎臟疾病的發(fā)生和發(fā)展。許多體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)均表明腎小管上皮細(xì)胞在腎間質(zhì)纖維化的發(fā)生機(jī)制中起重要作

2、用。但共刺激分子CD40信號(hào)對(duì)腎小管上皮的作用目前報(bào)道較少，本試驗(yàn)旨在探討CD40信號(hào)激活對(duì)腎小管上皮細(xì)胞在增殖、凋亡及效應(yīng)性細(xì)胞因子分泌中的作用。 方法：CD40激發(fā)型單抗5cll以不同劑量(增殖方面為2ug/ml、5ug/ml、10ug/ml，凋亡方面為5ug/ml)對(duì)HK2細(xì)胞分別經(jīng)過(guò)三、六、九天的刺激后，以MTT法和流式細(xì)胞儀法分別檢測(cè)CD40信號(hào)對(duì)細(xì)胞增殖和凋亡方面的影響。將細(xì)胞分組如下：正常HK2細(xì)胞；正常HK2細(xì)胞

3、+鼠IgG對(duì)照；正常HK2細(xì)胞+5cll；正常HK2細(xì)胞+CD40L/919細(xì)胞(CD40L表達(dá)陽(yáng)性的CD40L轉(zhuǎn)基因細(xì)胞)；正常HK2細(xì)胞+mark細(xì)胞(CD40L表達(dá)陰性的CD40L空轉(zhuǎn)基因細(xì)胞)；正常HK2細(xì)胞+CD40L/919細(xì)胞+IBl(CD40L的阻斷性抗體)；正常HK2細(xì)胞+CD40L/919細(xì)胞+481(CD40L的阻斷性抗體)，分別收集以上各組二、四、六天時(shí)的細(xì)胞培養(yǎng)上清，以ELISA法檢NHK2表面CD40信號(hào)途徑

4、激活后及CD40信號(hào)阻斷后細(xì)胞培養(yǎng)上清中趨化因子RANTES的(調(diào)節(jié)正常T細(xì)胞表達(dá)和分泌的細(xì)胞因子．regulated upon activation normal T cell expressed and seeretedfactor)含量。 結(jié)果：HK2表達(dá)CD40高達(dá)87.6％，CD40L/919細(xì)胞表面表達(dá)CD40L高達(dá)92％。MTT法示CD40信號(hào)激活后的第六天時(shí)HK2對(duì)照組OD值為1.320±0.057：2ug/ml

5、 5cll組為1.283±0.085；5ug/ml 5cll組為1.106±0.049；10ug/ml 5cll組為1.101±0.03，九天時(shí)HK2對(duì)照組OD值為2.326±0.072；2ug/ml 5cll組為2.247±0.075；5ug/ml 5cll組為2.026±0.46；10ug/ml 5cll組為1.780±0.04，提示CD40信號(hào)激活后可抑制細(xì)胞增殖(P<0.01)，流式細(xì)胞儀檢測(cè)5cll組較對(duì)照組凋亡率六天時(shí)增高1

6、.75±0.335倍，九天時(shí)增高2.14±0.205倍(P<0.05)。CD40信號(hào)激活后也可引起HK2分泌RANTES增多(二、四、六天時(shí)HK2+5cll組和HK2+CD40L/919組較HK2對(duì)照組RANTES含量明顯增高(P<0.001)．HK2+CD40L/919+181(CD40L的單克隆抗體)組和HK2+CD40L/919+481(CD40L的單克隆抗體)較HK2對(duì)照組增高(P<0.05)，但與HK2+CD40L/919組相