肝再生增強(qiáng)因子對(duì)大鼠腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化影響的研究.pdf

1、目的：利用已構(gòu)建的大鼠肝再生增強(qiáng)因子(rALR)畢赤酵母(pichiapastoris)重組表達(dá)質(zhì)粒pPIC9K-rALR，在酵母菌GS115中誘導(dǎo)表達(dá)rALR，并進(jìn)行純化和體外生物學(xué)活性鑒定，為進(jìn)一步研究rALR的生物學(xué)功能提供基礎(chǔ)；探討重組大鼠肝再生因子(rrALR)對(duì)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的影響。 方法：經(jīng)PCR鑒定的重組質(zhì)粒pPIC9K-rALR酶切線性化后轉(zhuǎn)入宿主菌GSl15中，在甲

2、醇誘導(dǎo)下進(jìn)行表達(dá)。表達(dá)產(chǎn)物rALR經(jīng)超濾方法純化后，用15％SDS-PAGE和Western blot印跡鑒定。采用3H-TdR摻入法，觀察rALR在體外對(duì)人肝癌細(xì)胞株QGY的促增殖作用以鑒定其活性；觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化，檢測(cè)α平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)、E一鈣粘蛋白(E-cadherin)和結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(CTGF)蛋白及mRNA的表達(dá)水平。 結(jié)果：目的蛋白rALR以外分泌方式在宿主菌GSl15中獲得高效表達(dá)，其分子量約為1