人IgA-IgM Fc受體：Fcα-μR的表達(dá)和功能分析.pdf

1、Fcα/μR是一種新發(fā)現(xiàn)的IgA和IgM的Fc受體。人Fα/μR為單基因家族成員，其基因位于1號(hào)染色體lq32區(qū)，毗鄰其它FcR基因，包括FcγR1a、FcγR2、FcγR3、FcγR1a和pIgR。小鼠的Fcα/μR高親和力的結(jié)合IgM，中等親和力的結(jié)合IgA。人Fcα/μR為Ⅰ型跨膜蛋白，包含有522個(gè)氨基酸和3個(gè)膜外區(qū)結(jié)構(gòu)域。其中Ig樣結(jié)構(gòu)域EC2與人、牛和小鼠的pIgR膜外區(qū)的第一個(gè)結(jié)構(gòu)域有很高的序列同源性，提示這兩個(gè)受體間可能

2、存在親緣上和功能上的關(guān)系。小鼠的Fcα/μR表達(dá)在胸腺、脾、肝、腎、小腸和大腸、睪丸和一些成熟的B細(xì)胞和單核細(xì)胞上。人的Fcα/μR表達(dá)在腎、小腸和二級(jí)淋巴器官。 為了確定Fcα/μR在免疫系統(tǒng)中的作用，區(qū)分Fcα/μR與pIgR的表達(dá)和功能，本研究制備了抗Fcα/μR與pIgR的單克隆抗體。Fcα/μR與pIgR的膜外區(qū)分別構(gòu)建到pET30a質(zhì)粒中，在E.coli中表達(dá)。得到的包涵體蛋白經(jīng)純化后免疫Balb/c小鼠并進(jìn)行細(xì)胞融

3、合。產(chǎn)生的單克隆抗體經(jīng)ELISA、流失細(xì)胞分析、Western blott和免疫組化分析鑒定。用確定的特異性抗體進(jìn)行組織人多組織器官表達(dá)分析。 人多組織器官的免疫組化分析結(jié)果顯示，F(xiàn)cα/μR表達(dá)在腎小管上皮細(xì)胞和腎小球系膜區(qū)；脾、淋巴結(jié)和闌尾淋巴小結(jié)中的生發(fā)中心；還有散在于消化道粘膜固有層內(nèi)的漿細(xì)胞上。而pIgR則主要集中在小腸、大腸、肺泡和膽囊的上皮細(xì)胞上。在其它組織，例如胃底腺、乳腺、睪丸、前列腺和心肌組織，F(xiàn)cα/μR與

4、pIgR均有不同程度的表達(dá)。Fα/μR在腦組織表達(dá)陽(yáng)性。 于pIgR的表達(dá)相比，F(xiàn)cα/μR主要存在于兩種組織。其一是位于呼吸、消化和泌尿生殖等通道下層的淋巴組織；另一種是也同時(shí)表達(dá)pIgR的上皮細(xì)胞，如乳腺和腎。然而即使是在這種情況下，這兩個(gè)受體也會(huì)因表達(dá)在不同的側(cè)面而執(zhí)行不同的功能跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)或者吞噬的功能。 IgA腎病(IgAN)是一種最常見(jiàn)的腎小球炎癥，同時(shí)也是最主要的導(dǎo)致腎功能衰竭的原因。IgAN的發(fā)病機(jī)制還不清楚

5、。本文用針對(duì)Fα/μR的單克隆抗體檢測(cè)了相關(guān)的腎細(xì)胞。其中Fcα/μR表達(dá)在原代培養(yǎng)的人系膜細(xì)胞(HMC)和近曲小管上皮細(xì)胞(PTEC)上。在正常人近曲小管細(xì)胞系HK—2上，同樣檢測(cè)到了Fcα/μR的蛋白表達(dá)。 本實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，表達(dá)在HK—2細(xì)胞上的Fcα/μR是一個(gè)功能性的IgA受體。用Fcα/μR的中和抗體可以特異性的阻斷HK—2細(xì)胞與pIgA2和血清IgA的結(jié)合，并且阻止HK—2吞噬IgA/IgM免疫復(fù)合物。 免疫