抑癌基因肺癌抑制物1(TSLC1)對(duì)人食管癌Eca109細(xì)胞裸鼠移植瘤生長(zhǎng)增殖的影響.pdf

1、[目的]
　　 建立轉(zhuǎn)染人TSLC1基因的人食管癌Eca109細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)株和探討TSLC1基因在調(diào)節(jié)食管癌細(xì)胞在裸鼠體內(nèi)生長(zhǎng)和浸潤(rùn)中的作用，為進(jìn)一步明確TSLC1基因?qū)κ彻馨┑淖饔脵C(jī)制奠定基礎(chǔ)。
　　 [方法]
　　 1.轉(zhuǎn)染人TSLC1基因的人食管癌Eca109細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)株的建立
　　 (1)pIRES2-EGFP-TSLC1重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染人食管癌Eca109細(xì)胞株；
　　 (2)轉(zhuǎn)染了TSL

2、C1基因的人食管癌Eca109細(xì)胞株的陽(yáng)性篩選與克隆。
　　 2.TSLC1基因?qū)θ耸彻馨〦ca109細(xì)胞裸鼠移植瘤生長(zhǎng)增殖的影響
　　 (1)裸鼠皮下成瘤：實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組及空白組細(xì)胞分別于裸鼠背部皮下注射以形成皮下腫瘤，每組注射10只。
　　 (2)裸鼠尾靜脈注射形成內(nèi)臟轉(zhuǎn)移瘤：實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組及空白組細(xì)胞分別于裸鼠尾靜脈注射以形成內(nèi)臟轉(zhuǎn)移瘤，每組注射10只。
　　 3.指標(biāo)檢測(cè)
　　 ①觀察三組

3、細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變。
　　 ②TSLC1在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)情況：RT-PCK檢測(cè)。
　　 ③小鼠一般情況觀察。
　　 ④腫瘤生長(zhǎng)變化：每隔一天用游標(biāo)卡尺測(cè)量裸鼠皮下腫瘤最大的長(zhǎng)徑、寬徑及厚徑一次，三徑互相垂直，記錄體積變化。
　　 ⑤抑瘤率：抑瘤率=空白組腫瘤平均體積-實(shí)驗(yàn)組腫瘤平均體積/空白組腫瘤平均體積x100％。
　　 ⑥病理學(xué)檢查：裸鼠皮下及肝、肺臟內(nèi)成瘤大小，浸潤(rùn)范圍，腫瘤組織分化差異，腫瘤血管形

4、成的差異等。
　　 [結(jié)果]
　　 1.TSLC1在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)情況
　　 陽(yáng)性篩選后通過(guò)RT-PCR測(cè)定實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞中TSLC1基因的表達(dá)，結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞存在TSLC1基因表達(dá)。
　　 2.細(xì)胞形態(tài)變化
　　 實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞呈圓形或橢圓形，聚集成團(tuán)，細(xì)胞團(tuán)之間疏散，細(xì)胞狀態(tài)較差；對(duì)照組和空白組細(xì)胞呈多邊形或梭形，細(xì)胞之間交織緊密，細(xì)胞生長(zhǎng)旺盛。
　　 3.小鼠一般情況
　　 實(shí)驗(yàn)組裸

5、鼠生活狀態(tài)始終正常、食欲旺盛、行動(dòng)自如?？瞻捉M和對(duì)照組裸鼠逐漸出現(xiàn)食欲不振、精神萎靡、活動(dòng)減少。
　　 4.腫瘤生長(zhǎng)變化
　　 空白組裸鼠于接種后5天開始出現(xiàn)腫瘤，腫瘤的平均體積為272.42mm3。對(duì)照組裸鼠于接種后5天開始出現(xiàn)腫瘤，腫瘤的平均體積為256.34mm3。實(shí)驗(yàn)組裸鼠于接種后10天開始出現(xiàn)腫瘤，腫瘤的平均體積為162.07mm3。
　　 5.抑瘤率
　　 抑瘤率：抑瘤率=空白組腫瘤平均體積-

6、實(shí)驗(yàn)組腫瘤平均體積/空白組腫瘤平均體積x100％。抑瘤率=272.42.162.07/272.42x100％=40.51％。
　　 6.病理學(xué)檢查
　　 (1)皮下成瘤：實(shí)驗(yàn)組腫瘤大小及浸潤(rùn)范圍均小于空白組和對(duì)照組，腫瘤分化稍好于空白組和對(duì)照組，腫瘤血管形成較空白組和對(duì)照組差?？瞻捉M和對(duì)照組之間無(wú)明顯差異。
　　 (2)內(nèi)臟成瘤：三組裸鼠內(nèi)臟均無(wú)形成明確的腫瘤，尚無(wú)法比較。
　　 [結(jié)論]